[发明专利]大豆7S球蛋白(α+β)亚基缺失型种质的α－亚基基因的特异性序列片断

说明书

技术领域

本发明涉及一种大豆蛋白的基因序列片断。

背景技术

7S球蛋白是大豆种子贮藏蛋白的重要组分之一，大豆7S球蛋白亚基组成的不同直接影响大豆蛋白的营养品质和加工特性。大豆7S球蛋白也称β-伴大豆球蛋白，是由α′-(76kDa)，α-(72kDa)和β-(52-54kDa)三个亚基组成的分子量为150kDa的三聚体化合物，具有天然的降血脂和降低血清胆固醇含量的保健功能。近年的研究结果表明：大豆7S球蛋白的α-亚基是大豆蛋白的主要过敏源之一，但现有技术不能够实现在分子水平上调控大豆7S球蛋白α-亚基的表达。

发明内容

本发明是为了解决现有技术不能在分子水平上调控大豆7S球蛋白α-亚基的表达的问题，而提供大豆7S球蛋白(α+β)亚基缺失型种质的α-亚基基因的特异性序列片断。

大豆7S球蛋白(α+β)亚基缺失型种质的α-亚基基因的特异性序列片断长度为1379bp，基因序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明成功的制备出与大豆7S球蛋白(α+β)亚基缺失型种质α-亚基缺失特性相关的α-亚基基因的特异性序列片断，实现了在分子水平上调控大豆7S球蛋白α-亚基的表达。

(α+β)-亚基缺失型与日E(亚基表现正常型)的部分α-亚基基因扩增片段的序列(NCBI序列号为GeneBank：M36686)进行比较，日E(亚基表现正常型)与(α+β)-亚基缺失型之间相同的核苷酸同源性为90.9％。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式按照如下方法制备大豆7S球蛋白(α+β)亚基缺失型种质的α-亚基基因的特异性序列片断：

一、大豆7S球蛋白α-亚基缺失突变体的分析确认(SDS-PAGE梯度电泳法)

a、称取5mg的大豆粉，加入0.5mL的抽提缓冲液(0.05M盐酸缓冲液(Tris-HCl，pH8.0)，0.2％十二烷基硫酸钠(SDS)，5M尿素(Urea))充分混匀，在室温条件下静置过夜，加入10μL的巯基乙醇，混匀，在4℃的条件下以14000r/min的速度离心15min，取20μL上清液进行SDS-PAGE电泳与考马斯亮蓝染色；

b、凝胶制备：

(1)分离胶：11.98％的分离胶配方如表1所示，依表中顺序加入试剂，搅拌均匀，最后加入N，N，N′，N′-四甲基乙二胺(TEMED)，混匀后快速灌入装好的玻璃板内，用胶头滴管加入一水层，等待分离胶凝固大约10分钟，凝固后倒掉水层；

表1

 

药品用量1MTris-HCI(pH8.8，0.27％SDS)6.3mL丙烯酰胺:甲叉丙烯酰胺＝30:0.86.65mL蒸馏水4mL10％APS(NH₄)₂S₂O₈0.1mLTEMED0.02mL计17.09mL