[发明专利]胡椒木离体培养方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及植物组织培养技术，具体涉及一种胡椒木离体培养方法。 

背景技术

胡椒木(Zanthoxylum Piperitum)，是芸香科多年生常绿灌木，又名黑胡椒、山椒、风车草。株高约30～90公分，雌雄异株，雄花黄色，雌花红橙色，子房3～4个，果实椭圆形。胡椒木的观赏价值较高，主要集中在枝叶上，约0.6公分的倒卵形对生小叶，革质，浓绿油亮，娇小玲珑，非常可爱。枝叶青翠适合修剪成型、庭植美化、绿篱或盆栽，成为庭院、公园中进行平面及垂直绿化的良好材料。胡椒木一般采用扦插方式繁殖，但是扦插繁殖受母株材料和繁殖季节的影响，往往无法满足市场的需要。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种任何季节均能大量快速繁殖胡椒木的方法。 

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案： 

胡椒木离体培养方法，包括如下步骤： 

S1)、准备外植体：即准备适合发芽的胡椒木茎段作为外植体； 

S2)、诱导：将步骤S1准备的外植体接种于幼芽诱导培养基上，使得外植体上发出幼芽，所述的幼芽诱导培养基为MS+6-苄基腺嘌呤0.5～4.0mg/L+萘乙酸0.1～0.7mg/L； 

S3)、增殖：将步骤S2中所述幼芽接种于增殖培养基上增殖产生丛生芽，所述增殖培养基为MS+6-苄基腺嘌呤0.5～2.0mg/L+萘乙酸0.1～0.7mg/L； 

S4)、生根：将步骤S3中所述的丛生芽接种于生根培养基使得丛生芽生根，即成胡椒木幼苗，所述生根培养基为1/2 MS+萘乙酸0.05～0.5mg/L。 

优选的技术方案中，所述幼芽诱导培养基优选为MS+6-苄基腺嘌呤1.0mg/L+萘乙酸0.7mg/L。 

优选的技术方案中，所述增殖培养基优选为MS+6-苄基腺嘌呤1.0mg/L+萘乙酸0.7mg/L。 

优选的技术方案中，所述生根培养基优选为1/2MS+萘乙酸0.4mg/L。 

具体的，所述步骤S1包括制作外植体和消毒两个步骤；所述制作外植体是指选择胡椒木枝条剪切成包括侧芽的胡椒木茎段；所述消毒是指对前述胡椒木茎段进行消毒处理。 

优选的技术方案中，所述制作外植体具体包括：挑选健壮的当年生胡椒木幼嫩枝条，除去叶片后用蒸馏水清洗，然后剪成胡椒木小段，并且使得每段胡椒木小段至少包含一个侧芽，每小段包含侧芽的胡椒木茎段即是外植体。 

优选的技术方案中，所述消毒是指对作为外植体的胡椒木茎段先用75％酒精消毒，再用0.1％的升汞溶液消毒，之后再用无菌水冲洗。 

采用本发明技术方案的胡椒木离体培养方法，与现有技术对比的有益效果在于： 

由于采用了组织培养技术对胡椒木进行离体培养，可以不受季节限制，快速低成本的繁殖出大量胡椒木的幼苗，因而经济效益可观，具有良好的市场前景。 

由于采用特制的MS+6-苄基腺嘌呤0.5～4.0mg/L+萘乙酸0.1～0.7mg/L作为幼芽诱导培养基，在其中诱导外植体发芽，发芽率高。 

由于进一步优选了幼芽诱导培养基的配方，使得发芽率最高可达95.8％。 

由于采用特制的MS+6-苄基腺嘌呤0.5～2.0mg/L+萘乙酸0.1～0.7mg/L作为增殖培养基，在其中对幼芽进行增殖，可使得幼芽产生出大量的丛生芽。 

由于进一步优选了增殖培养基的配方，使得增殖效果最好。 

由于采用了特制的1/2MS+萘乙酸0.05～0.5mg/L作为生根培养基，生根效果好。 

由于进一步优选了生根培养基的配方，使得生根效果最好，生根率最高可达98％。 

由于准备外植体除了包括制作外植体外，还包括消毒，使得外植体干净无污染，可以保证后续步骤顺利进行。 

由于选用强壮的一年生幼嫩胡椒木枝条制作外植体，可以保证培养出来的胡椒木幼苗的遗传学质量。 

由于消毒包括酒精消毒和升汞溶液消毒，并且消毒后用无菌水清洗，使得消毒非常彻底。 

附图说明

图1是本发明具体实施方式中幼芽诱导阶段初期的植株图； 

图2是本发明具体实施方式中幼芽诱导阶段后期的植株图； 

图3是本发明具体实施方式中幼芽增殖阶段的植株图； 

图4是本发明具体实施方式中丛生芽生根阶段的植株图。 

以下将结合附图对胡椒木茎段离体培养做进一步的说明。 

具体实施方式