[发明专利]不对称菁类化合物、其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及不对称菁类化合物及其用于生物样品染色的用途。

背景技术

网织红细胞是骨髓中晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞之 间的过渡型细胞，网织红细胞从骨髓释放到外周血后，随着其不断成 熟，细胞内的RNA含量也逐渐减少，直至完全消失。因此，细胞内 RNA的含量表示了网织红细胞的成熟程度。网织红细胞是血液学诊断 中评估红细胞生成能力的基础性试验，是贫血诊断、分型和疗效检测 的基础，能够确认骨髓的化疗和移植疗效，检测EPO(促红细胞生成 素)的疗效等。

早期检测网织红细胞主要是采用手工法镜检，但存在调制试样步 骤烦杂，人为影响因素较多，导致操作者间的变异达到25％～50％。 随着流式细胞分析仪的发展，自动化的仪器提高了网织红细胞测定的 准确度和精确度，同时提供了关于网织红细胞成熟度的可靠指标。荧 光染料的开发是发展荧光分析技术的具有决定性作用的因素。

发展初期应用的染料包括新亚甲蓝(NMB)、亮甲苯蓝(BCB)、 派诺宁Y、溴乙锭等。它们通过嵌入或静电吸引与核酸分子形成复合 物，从而可以在显微镜下观察增强后的荧光。但是这些染料自身也可 以形成染料复合物，不能明显区别于染料与核酸形成的复合物，造成 高的荧光背景干扰。同时，这些染料的荧光量子效率较低，降低了荧 光增强的程度，影响检测结果的准确性。

吖啶橙也应用在荧光分析中，可以和核酸形成复合物，使荧光增 强。这类染料分子相互之间在能量传递的过程中可能会导致光淬灭， 使得染料核酸复合物没有荧光发出，影响检测结果真实性。同时在流 式细胞分析仪中，吖啶橙和塑料管路有较强的作用，会增加背景荧光 强度。为了清除测试后残留的染料和保证测试结果的准确性，需要仪 器进行长时间的管路清洗，这就降低了仪器的分析效率。

已有人提出了一类噻唑蓝染料用于检测核酸和血液中的网织红 细胞。该类染料使用的激发波长在488nm，需要使用价格高昂的激光 器做光源，增加了仪器的使用成本。同时，这类染料需要较长的孵育 时间，才能和核酸较好的结合。

还公开了一种用于血液中网织红细胞染色的染料，它需要在35 ℃以上的反应条件下才能得到良好的检测结果，对仪器的使用条件提 出了较高的要求。

目前使用的红色半导体激光器只有在环境温度10℃左右可以发 出633nm波长的光，在工作过程中由于环境温度的逐渐升高其波长会 随之变化。在仪器稳定运行过程中，环境温度会达到40℃，此时激光 器的波长也会相应增加到640nm左右，而不能和荧光染料的最大吸收 峰很好的匹配，降低了检测结果的准确性。在此基础上，如果为了消 除温度对检测结果的影响，需要增加恒温装置，则大大增加了仪器的 成本。

因此，需要开发新的适合用作荧光染料的化合物，该化合物优选 具有以下性质：无核酸时自身几乎没有荧光，与核酸形成复合物后荧 光强度迅速增加并且光谱在近红外区，避免背景荧光的干扰；可以在 640nm附近被激发且其波长在40℃可以保持稳定，与使用的半导体 激光器工作波长相匹配；对RNA有一定的特异性结合。

发明内容

本发明的上述种种目的通过提供本发明化合物而得以实现。因 此，本发明一方面提供了一类具有以下通式I结构的化合物：

其中

n为1、2或3；

X为C(CH₃)₂、O、S或Se；

R₁和R₂各自独立选自H、卤素、C_1-8烷基磺酸基，且R₁和R₂不同时为H；

R₃、R₄各自独立选自C_1-18烷基、C_1-8烷基OR₅；且R₂为卤素时 R₃和R₄不同时为烷基；

R₅为氢原子、酰基或者低级烷基；

Y^-为负离子。

本发明还一方面提供一种缀合物，所述缀合物包含上述式I化合 物。

本发明另一个方面还提供用于生物样品染色的组合物，所述组合 物包含上述式I化合物或其缀合物。