[发明专利]一种脂质体流感疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及生物预防医药领域，具体涉及一种包裹生物药物的用于流感防治的脂质体疫苗。 

背景技术

普通的流感疫苗只能激发机体的体液免疫，而无法激发机体的细胞免疫。目前用于临床的流感疫苗中有效抗原的含量较高，限制了流感疫苗的生产能力。有专家预测，新一轮流感大流行即将到来，对流感疫苗的潜在需求量远远超过目前人类的生产能力，因此如何使流感疫苗可在减少抗原使用量的情况下，提高流感疫苗的免疫水平，特别是加强流感疫苗刺激机体产生的细胞免疫能力，更加提高了集体对流感病毒的抵抗力。因此，加快流感疫苗佐剂的研究具有十分重要的意义。 

发明内容

为了克服上述现有技术中的不足之处，本发明提出一种新型的免疫性脂质体，它包含流感疫苗所含病毒的主要抗原组分(蛋白或糖蛋白)，也可以包括或不包括免疫调节组分，它既能在减少免疫剂量的条件下达到明显的免疫效果，又能延长疫苗的免疫保护时间。 

本发明提供一种脂质体流感疫苗，所述脂质体的膜带有电荷，所述流感疫苗的抗原组分包裹于脂质体内或镶嵌于脂质体膜中或由于电荷而吸附与膜上。 

本发明中的流感疫苗包括全病毒灭活流感疫苗，流感裂解型疫苗和流感亚单位疫苗，流感疫苗抗原组分包括流感病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。所述血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)包括H1N1、H3N2和/或B。 

其中，脂质体流感疫苗单位剂量中含流感疫苗HA/NA组分的量是5ug-100ug；优选量是10ug-50ug。 

本发明流感疫苗还包含免疫调节剂或附加剂。免疫调节剂为细胞因子类蛋白，包括干扰素(IFN-α、IFN-β、IFN-γ)，白介素(IL-1、IL-2、IL-4、IL14、IL16)、胸腺肽α1、免疫核糖核酸。附加剂为抗氧化剂，如维生素E等，并可加入正或负电荷磷脂，防止脂质体凝聚、融合，改变剂型，制备冻干剂，避免渗漏，延长脂质体保存时间。 

本发明脂质体为小单层和大多层脂质体共存的脂质体。其中，脂质体球径为50～5000nm，本发明较优选的脂质体粒径范围是为100～1500nm，平均粒径在300～800nm之间。 

脂质体为一种生物膜双分子层囊性微球，由水相中脂质双层疏水区的脂肪链通过疏水键相互聚集自行收缩排列而形成，在其形成过程中可包裹水溶性成分获得颗粒形态，被包裹的内容物可以受到脂质体膜的保护。水溶性抗原包被于脂质体中可借助脂质体的传递被直接送达抗原提呈细胞的胞质中，脂质体膜基质及附加的修饰成分还可以直接活化免疫细胞的信号传递系统。在脂质体膜的保护下，抗原分子可以不受体液成分的破坏，脂质体类疫苗可用于多种黏膜途径的免疫接种。通过选择脂质体膜基质组分及对脂质体膜加以修饰，还可以选择所诱导的免疫反应的类型。淋巴结树突状细胞和组织巨噬细胞都能够吞噬脂质体，在这些细胞内抗原经过加I表达于I型主要组织相容性分子(MHC功，激发免疫反应，诱导特异性T细胞和细胞毒性T细胞免疫。脂质体是用作疫苗的传递载体和免疫佐剂的很好选择。 

本发明所涉及的脂质体是由磷脂、非磷脂、固醇类及它们的衍生物和膜材组成。 

用于制备脂质体的有卵磷脂、豆磷脂，磷脂酰乙醇胺、胆固醇、脑磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇乙酰、牛胆酸钠、蛋磷脂酰胆碱、二棕榈酰-DL-a磷脂酰胆碱、磷脂酰丝胺酸、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、鞘髓磷脂、二鲸蜡磷酸酯、二肉豆蔻卵磷脂、硬脂酰胺、二氧乙烯十六烷基醚和四氧乙烯十二烷基醚等。 

本发明所涉及的脂质体膜材包括但不限于胆固醇、十八胺、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸等。胆固醇可以调节双分子层流动性、通透性等，十八胺、磷脂酸等可以改变脂质体表面电荷性质。 

脂质体制备的基本原理都是将油性材料与水性材料经过适当处理后形成油包水的制剂，常规的脂质体制备方法，包括薄膜法、逆相蒸发法、加压挤出法、熔融法及冻干水化法。 

本发明脂质体流感疫苗的优选的制备工艺是逆相蒸发法、冻干水化法。本发明最优选的脂质体的制备工艺是冻干水化法。 

本发明脂质体流感疫苗的制备方法，冻干水化法，包括如下步骤： 

1、将脂质体、膜材及附加剂或免疫调节剂以摩尔比(5~10)∶(1~5)∶(1~3)溶于溶媒中，置于旋转蒸发器中，除去有机溶媒，旋转蒸发形成磷脂膜； 

2、加入缓冲液，40~60℃，超声10~20分钟，形成脂质体悬液； 

3、将脂质体悬液与流感疫苗抗原溶液混合，脂质体粉碎均匀，加入冷冻保护剂，进行冷冻干燥；