[发明专利]天然除虫菊酯多克隆抗体的制备方法

权利要求书

1.一种天然除虫菊酯6种人工抗原及多克隆抗体的制备方法，其特征在于：

[1]利用合成含羧基半抗原的方法制备天然除虫菊酯6种单体的半抗原；

[2]采用碳二亚胺(EDC)法将合成的半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备除虫菊酯6种完全抗原；

[3]利用除虫菊酯6种完全抗原免疫BALB/c小鼠，制备天然除虫菊酯的多克隆抗体。

2.一种权利要求1所述的除虫菊酯6种人工半抗原的制备方法，其特征在于：

[1]在除虫菊酯6种单体的五元环酮基上引入羧基基团；

[2]用含芳香基团的对肼苯甲酸和纯度99％以上的6种单体分别溶解在无水乙醇或丙酮与乙腈按3∶7比例混合的溶液中，并在pH值4～5条件下发生亲核加成消除反应，此时溶液表现为黄色；

[3]再经过旋转浓缩，乙醚抽提和Na₂SO₄脱水，制得6种半抗原，产率可达58％；

3.一种权利要求1所述的除虫菊酯6种完全抗原的制备方法，其特征在于：

[1]取6种羧基半抗原与牛血清白蛋白(BSA)按摩尔比70∶1～80∶1混合，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺在pH值7.5-8.5的PB、PBS磷酸缓冲液以及0.2mol/L NaOH溶液中，发生偶联反应；

所述PBS磷酸缓冲液生理盐水：137mM NaCl、2.7mM KCl、8mM Na₂HPO₄、2mM KH₂PO₄，pH值为7.5-8.5；PB磷酸缓冲液：9.5mM Na₂HPO₄、0.5mM NaH₂PO₄，pH值为7.5-8.5；

[2]在磁力搅拌和避光条件下充分反应12h，静置10h；然后充分透析48h以上制得完全抗原，分装并于-20℃或-80℃保存。

4.一种权利要求1所述的天然除虫菊酯多克隆抗体的制备方法，其特征在于：

[1]取除虫菊酯6种完全抗原分别与等量的完全福氏佐剂和不完全福氏佐剂混合制备免疫原，终浓度为20μg/mL；

[2]用6种免疫原混合免疫BALB/c小鼠，首次免疫使用完全佐剂加等量抗原，再次免疫使用不完全佐剂加等量抗原，3次免疫不用佐剂，免疫剂量每次10μg/只，3次免疫后取血清采用间接ELISA检测抗体效价，当效价达到10⁴～10⁵时，追加免疫1次，剂量20μg/只，7～10天后采血制得多克隆抗体；于-80℃保存；

5.根据权利要求1，包括利用类似的方法制备天然除虫菊酯6种人工半抗原和完全抗原，并用于制备天然除虫菊酯多克隆抗体的方法。