[发明专利]重组人干扰素调节因子4结合蛋白表达体系及制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种蛋白表达体系，尤其涉及一种重组人干扰素调节因子4结合蛋白表达体系及制备方法与应用。

背景技术

随着分子生物学和分子遗传学理论和技术的发展，基础和临床免疫学的进展迅速，自身免疫性疾病(AID)也有了全新的概念。正常情况下，T淋巴细胞在胸腺内经负性选择(克隆缺失)，使进入外周血的成熟T细胞不会排斥自身抗原，只对非自身抗原进行反应，以维持机体的稳定。在某些情况下，上述自身耐受性遭受破坏，免疫系统对自身组织成分产生明显的免疫应答反应，称为自身免疫反应(AIR)。当AIR造成自身组织损伤和相应的功能障碍，导致疾病的发生，称为AID。AIR的发生机制极为复杂，目前对其引发的AID的治疗尚无重大突破。因此，对于AIR发生的分子机制的进一步研究和探索，将能对临床的治疗提供新的思路和手段。

目前对自身免疫反应的发生机制已有了一定的认识，越来越多的细胞与分子被证明与自身免疫反应关系密切，在自身免疫病致病机制及治疗过程中发挥重要作用。活化的T细胞及其细胞因子介导的不正常免疫应答在其中扮演重要角色。TH1细胞因子主要参与器官特异性自身免疫性疾病，如类风湿关节炎(RA)、胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)、多发性硬化(MS)及甲状腺疾病等；TH2细胞因子在系统性红斑狼疮(SLE)、哮喘、过敏性疾病，艾滋病中占优势。故对T细胞及其相关分子的作用机制的研究引起了愈来愈多研究者的关注。

2003年，Pernis与Hu CM博士合作，通过酵母双杂交技术，从人淋巴结cDNA文库中筛选出一个IRF-4结合蛋白即人干扰素调节因子4结合蛋白，并将其命名为IBP(IRF-4 binding protein)。序列分析结果显示，IBP的cDNA全长约2.3kb，包含一个1893bp的开放阅读框(open reading frame，ORF)，编码631个氨基酸，分子量约75KD，其编码基因位于人染色体6p21.31。分析还发现IBP与Borggrefe报告的在B细胞的激活信号传导及Ig亚类转换有重要作用的SWAP-70分子结构很相似，从N端到C端依次为EF-hand、PH(pleckstrin-homology)、DH(Db1-homology)结构域。进一步组织学分布和功能研究发现IBP主要表达于T淋巴细胞。同年，Altman课题组在体外分化的鼠源性Th1和Th2细胞中，利用差异显示分析技术分离出一段选择性表达于Th2细胞的基因片断，由于与SWAP-70有同源性，命名为SLAT(SWAP-70Like Adapter of T cells)，实际SLAT即为鼠源性IBP。

为进一步研究IBP在T细胞中的功能，申请人所在实验室与Pernis研究组合作，利用gene trapping技术使IBP表达缺失，成功建立了IBP^trap/trap小鼠模型。长期观察发现IBP缺失小鼠有系统性自身免疫反应的发生，特征为效应/记忆T细胞和IgG⁺B细胞的积聚，高r球蛋白血症及产生自身抗体。且IBP^trap/trapT细胞在体内外均有抗凋亡现象，亦表现出某些效应功能的选择性缺陷。而有效的免疫应答需要外周T细胞适度的活化和分化及随后的适度凋亡，以达到免疫自稳，对T细胞功能和存活的调节受损后将会导致自身免疫反应发生。这些结果有力说明IBP的缺失在诱发自身免疫反应中起着重要的作用。