[发明专利]白唇竹叶青蛇毒5＇－核苷酸酶的制备方法无效
| 申请号： | 200810069541.4 | 申请日： | 2008-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN101265469A | 公开（公告）日： | 2008-09-17 |
| 发明（设计）人： | 余晓东;陈夏 | 申请（专利权）人： | 重庆师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/22 | 分类号： | C12N9/22 |
| 代理公司： | 重庆市前沿专利事务所 | 代理人： | 郭云 |
| 地址： | 400047*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 竹叶青 蛇毒 核苷酸 制备 方法 | ||
1.一种白唇竹叶青蛇毒5′-核苷酸酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)白唇竹叶青蛇毒的预处理：取白唇竹叶青蛇毒液，按体积比1∶3～1∶6添加到浓度为0.01～0.05mol/L、pH为8.0～9.0的Tris-HCl缓冲液中，在温度为4～20℃、转速为3000～5000r/min的条件下离心10～20min，取上清液备用；
(2)DEAE-Sephadex A-25层析柱初步分离：先用浓度0.01～0.05mol/L、pH8.0～9.0的Tris-HCl缓冲液平衡柱子，然后将步骤(1)所得的上清液加入DEAE-Sephadex A-25层析柱上，再用浓度0.01～0.05mol/L、pH8.0～9.0的Tris-HCl缓冲液洗脱，洗脱流速为18～36ml/h，收集洗脱液、低温浓缩，获得粗品a；
(3)Sephadex-G-100层析柱纯化：先用浓度0.01～0.05mol/L、pH7.0～8.0的Tris-HCl缓冲液平衡柱子，然后将粗品a重新溶解在浓度为0.01～0.05mol/L、pH为7.0～8.0的Tris-HCl缓冲液中，加入Sephadex-G-100层析柱上，用浓度为0.01～0.05mol/L、pH为7.0～8.0的Tris-HCl缓冲液洗脱，洗脱流速为3～12ml/h，用试管收集洗脱液，将洗脱液合并、低温浓缩，获得粗品b；
(4)CM-Sephadex C-50进一步纯化：先用浓度0.01～0.05mol/L、pH 5.5～6.6的NaAc缓冲液平衡柱子，然后将粗品b溶解在浓度0.01～0.05mol/L、pH为5.5～6.6的NaAc缓冲液中，加入CM-Sephadex C-50层析柱上，再用浓度0.01～0.05mol/L、pH为5.5～6.6的NaAc缓冲液洗脱；接着用浓度0.01～0.05mol/L、pH为5.5～6.6NaAc缓冲液线性梯度洗脱，洗脱液中NaCl的浓度范围为0.02至1mol/L，洗脱流速为18～24ml/h，收集此时的洗脱峰、除盐后冻干，获得产品。
2.根据权利要求1所述白唇竹叶青蛇毒5′-核苷酸酶的制备方法，其特征在于：所述制备步骤(4)中的除盐方法采用Sephadex G-25层析柱除盐。
3.根据权利要求1所述白唇竹叶青蛇毒5′-核苷酸酶的制备方法，其特征在于：所述制备步骤(4)中冻干方法为在低于-50℃温度下真空冷冻干燥。
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