[发明专利]一种应用于组织工程椎间盘髓核构建的种子细胞接种方法无效
申请号: | 200810069602.7 | 申请日: | 2008-04-29 |
公开(公告)号: | CN101285052A | 公开(公告)日: | 2008-10-15 |
发明(设计)人: | 黄博;李长青;周跃 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 |
主分类号: | C12N5/06 | 分类号: | C12N5/06;C12N5/08;A61L27/38 |
代理公司: | 重庆华科专利事务所 | 代理人: | 康海燕 |
地址: | 400037重庆市沙坪坝区新*** | 国省代码: | 重庆;85 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 应用于 组织 工程 椎间盘 构建 种子 细胞 接种 方法 | ||
1、一种应用于组织工程椎间盘髓核构建的种子细胞接种方法,所述方法采用的种子细胞接种载体为透明质酸,其步骤如下:
(1)首先将人或动物的椎间盘髓核细胞与用不含血清的DMEM/F12培养液配制的透明质酸溶液进行混悬,保证细胞悬液中髓核细胞的终浓度为1×105-1×106个/ml,透明质酸的终浓度为0.001-0.01mg/ml;
(2)将本身不含有透明质酸成分的组织工程髓核支架材料用不含血清的DMEM/F12培养液浸泡后吸干水分,放入培养皿中待用;
(3)将步骤(1)所制的细胞悬液缓慢滴加至支架材料,在37℃,5%CO2的孵箱内静置;
(4)30分钟后将细胞-支架复合体移入到培养瓶中,缓慢加入10%胎牛血清的DMEM/F12培养液,在37℃,5%CO2培养条件下进行培养,每隔2-3日进行换液,直到细胞在支架材料内进行增殖并合成细胞外基质,此时将细胞-支架复合体移植入动物或人体内进行研究或治疗。
2、根据权利要求1所述的应用于组织工程椎间盘髓核构建的种子细胞接种方法,其特征在于:所述支架材料为本身不含有透明质酸成分的组织工程髓核支架材料,选自I型胶原海绵支架材料、聚磷酸钙支架材料、藻酸盐支架材料、壳聚糖及其衍生物支架材料、聚羟基乙酸支架材料、聚乳酸支架材料。
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