[发明专利]冬虫夏草中多球壳菌素含量的测定方法

权利要求书

1.一种冬虫夏草中多球壳菌素含量的测定方法，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备

精密称取多球壳菌素对照品，加甲醇制成0.15mg/mL的多球壳菌素对照品溶液备用；

(2)标准曲线的制作

取多球壳菌素对照品溶液适量，分别精密吸取1、10、20、40、50μL注入高效液相色谱仪；采用色谱柱：C18色谱柱，流动相：乙腈与水体积比20～80∶80～20，流速0.6～1.2mL/min，柱温20～65℃，检测波长203nm；测定峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；

(3)供试品溶液的制备

提取：取冬虫夏草样品，经粉碎，通过20～200目的分样筛，然后精密称取0.1～5g置入容器中，加10～250mL溶剂提取，随后移出上清液，同法提取1～3次，得总提取液；其中所述冬虫夏草样品的提取溶剂为甲醇、乙醇的一种或它们的混合溶剂；所述提取方法采用超声提取法、加热回流提取法、浸泡提取法的一种；

过固相萃取柱：定量移取总提取液在常压或减压下挥干后用浓度小于50％的甲醇溶液1～10mL溶解，离心，取上清液作上样液；将上样 液加到十八烷基固相萃取柱上，待上样液通过十八烷基固相萃取柱后，第一次用浓度小于50％的甲醇溶液冲洗，冲洗液弃之；随后第二次用60％～100％的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；其中所述十八烷基固相萃取柱上样前先用甲醇活化和蒸馏水平衡；

供试品定容：收集含有多球壳菌素的洗脱液在常压或减压下挥干，向挥干后的残留物加入甲醇溶解，甲醇溶解液离心，取上清液即得供试品溶液；或甲醇溶解液用微孔滤膜过滤，取续滤液得供试品溶液；

(4)采用高效液相色谱仪进行测定

取供试品溶液，进样量为10μL，在步骤(2)的条件下进行HPLC测定，根据标准曲线，采用外标法确定多球壳菌素的含量。

2.根据权利要求1所述的冬虫夏草中多球壳菌素含量的测定方法，其特征在于冬虫夏草是指野生冬虫夏草、人工培育冬虫夏草及冬虫夏草无性型发酵菌丝体。

3.根据权利要求2所述的冬虫夏草中多球壳菌素含量的测定方法，其特征在于冬虫夏草无性型指的是中国被毛孢。

4.根据权利要求1所述的冬虫夏草中多球壳菌素含量的测定方法，其中步骤(2)所述乙腈与水体积比是65∶35，流速是1.0mL/min，柱温是30℃，检测波长是203nm。

5.根据权利要求1所述的冬虫夏草中多球壳菌素含量的测定方法，其中步骤(3)所述冬虫夏草样品的提取溶剂为甲醇。 

6.根据权利要求1所述的冬虫夏草中多球壳菌素含量的测定方法，其中步骤(3)所述冬虫夏草样品的提取方法是采用超声提取法。 

7.根据权利要求6所述的冬虫夏草中多球壳菌素含量的测定方法，其中所述超声提取法，超声提取时间每次为20～120min，每个样品提取1～3次。 

8.根据权利要求1所述的冬虫夏草中多球壳菌素含量的测定方法，其中步骤(3)提取后移出上清液采用过滤法或离心法。 

9.根据权利要求1所述的冬虫夏草中多球壳菌素含量的测定方法，其中步骤(3)上柱处理后第二次洗脱按每1g药材取4mL 80％甲醇进行洗脱。