[发明专利]检测人线粒体基因差异性表达的基因芯片

说明书

技术领域

本发明属于检测人线粒体基因表达的实验工具，具体的说，涉及一种检测两种状态下人线粒体基因(mtDNA)和(nDNA)差异表达的实验工具。

背景技术

目前，表达谱芯片是目前应用最广泛的基因芯片，是将少则几十个、多则成千上万个特异的探针固定于一块载体上，可用以检测整个基因组范围内的众多基因转录丰度的差异。表达谱芯片可以分析2组或2组以上不同来源的mRNA转录丰度的差异，通过计算信号的比值和统计分析来获取差异表达基因的信息。但目前人们着重发展基因芯片的高通量，其昂贵的实验费用使人们在科学研究中对其望而却步。同时人们对线粒体基因表达的研究仅局限于个别基因，缺乏对mtDNA在不同状态下差异表达的整体认识和对其进行内在联系的分析。

发明内容

本发明目的在于提供一种检测人体线粒体基因差异性的整体表达情况，及分析多个基因表达之间的内部联系的基因芯片。

一种检测人线粒体基因差异性表达的基因芯片，在氨基硅烷修饰的玻璃基片上点制有检测包括人线粒体基因编码的13种mRNA，2种rRNA和9种tRNA基因及核DNA(nDNA)编码的5种凋亡相关基因转录丰度的探针，其关键在于：

所述的13种mRNA是，氧化呼吸链酶复合体I的NADH-CoQ还原酶亚单位1(ND1)、NADH-CoQ还原酶亚单位2(ND2)、NADH-CoQ还原酶亚单位3(ND3)、NADH-CoQ还原酶亚单位4(ND4)、NADH-CoQ还原酶亚单位4L(ND4L)、NADH-CoQ还原酶亚单位5(ND5)、NADH-CoQ还原酶亚单位6(ND6)，复合体III的细胞色素b(Cytb)，复合物IV的细胞色素氧化酶亚单位I(Cox I)、细胞色素氧化酶亚单位II(Cox II)、细胞色素氧化酶亚单位III(CoxIII)，以及复合物V的ATP酶亚单位6(ATPase6)和ATP酶亚单位8(ATPase8或ND6L)；

所述2种rRNA是，12S核糖体RNA(12SrRNA)、16S核糖体RNA(16SrRNA)；

所述9种tRNA是，mtDNA轻链编码的丙氨酸转运RNA(tRNA-Ala)、天氡酰胺转运RNA(tRNA-Asn)、半胱氨酸转运RNA(tRNA-Cys)、谷氨酸转运RNA(tRNA-Glu)、丝氨酸转运RNA(tRNA-Ser)，重链编码的精氨酸转运RNA(tRNA-Arg)、天冬氨酸转运RNA(tRNA-Asp)、甘氨酸转运RNA(tRNA-Gly)、组氨酸转运RNA(tRNA-His)；

所述核DNA(nDNA)编码的5种凋亡相关基因是，Bad、Bax、Bcl-2、Bcl2-L1、P53。

上述氨基硅烷修饰的玻璃基片上还点制有看家基因Actingβ、GAPDH作为阳性内参照，人为书写长度为69mer寡核苷酸序列的探针为阴性内参照，并选择Hex(hexa-chloro-6-carboxy fluorescein)为检测样点固定的阳性对照。

分别检测所述人线粒体基因编码的13种mRNA转录丰度的寡核苷酸探针的序列为：

ND1：ACGCCATAAAACTCTTCACCAAAGAGCCCCTAAAACCCGCCACATCTACCATCACCCTCTACATCACCG；

ND2：ACAATAGCCTCATCATCCCCACCATCATAGCCACCATCACCCTCCTACCTCTACTTCTACCTACGCC；

ND3：AGAAATTGCCCTCCTTTTACCCCTACCATGAGCCCTACAAACAACTAACCTGCCACTAATAGTTATGTC；

ND4：CCGGCGCAGTCATTCTCATAATCGCCCACGGGCTTACATCCTCATTACTATTCTGCCTAGCAAACTCAA；

ND4L：TATTGTGCCTATTGCCATACTAGTCTTTGCCGCCTGCGAAGCAGCGGTGGGCCTAGCCCTACTAGTCTC；

ND5：ACAGGTCAACCTCGCTTCCCCACCCTTACTAACATTAACGAAAATAACCCCACCCTACTAAACCCCATT；

DN6：GTCAGGGGTTGAGGTCTTGGTGAGTGTTTTAGTGGGGTTAGCGATGGAGGTAGGATTCGTCCTGTGGGT；