[发明专利]附睾蛋白酶抑制蛋白B细胞表位及包含此表位的多重抗原肽

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及附睾蛋白酶抑制蛋白B细胞表位及包含此表位的多重抗原肽。

背景技术

计划生育是我国的基本国策，为有效地控制人口过度增长，开发高效、安全、可逆的避孕方法一直是计划生育研究的重要课题。目前，男性避孕还局限于传统的使用避孕套或输精管结扎手术，前者失败率较高，后者具有不可逆性，且可能产生意料不到的严重免疫学后果，如持续高水平的抗精子抗体滴度和/或睾丸形态学的改变等，二者均不能令人满意。多年来，国内外科学家一直致力于男性避孕疫苗的研制，主要是以生殖相关激素和精子特异性蛋白为靶抗原，如精子膜抗原PH-20、受精抗原FA-1、顶体抗原SP-10、受精素β等，已研制出的多价疫苗可明显抑制动物的精卵结合与融合，但避孕率仍停留在50％左右。

附睾是精子获能和成熟的场所，附睾蛋白酶抑制蛋白(epididymal proteaseinhibitor，Eppin)作为一种附睾特异表达的分泌蛋白，在保持精子活性以及精卵结合过程中均发挥重要作用。最新研究表明，用重组Eppin免疫的雄性猕猴出现可逆性的不育(避孕率7/9，可逆率5/7)，精液分析发现精子的前向运动能力减弱，而精子的数量及体内雄激素水平不受影响，亦未见自身免疫性疾病的发生，表明Eppin可作为潜在的有效的男性避孕疫苗。生育研究结果提示，抗Eppin抗体可能结合于精子表面，潜在地破坏了精子在男性生殖道内和射精后精子最初储存在女性阴道内的生存微环境，影响了精子的获能，干扰了精子受孕前的一些基本步骤，造成免疫性不育。

蛋白质抗原通过表位体现其免疫特异性。就某一蛋白质抗原而言，它不仅含有B细胞表位、T辅助细胞(Th)表位、细胞毒性T细胞(CTL)表位、自然杀伤细胞(NK)表位、主要组织相容性复合物(MHC)限制位等与免疫识别密切相关的结构，同时还含有毒性表位、抑制性表位、交叉反应性表位等不良表位，这些不良表位可引起免疫偏移、免疫颠覆等不利的免疫反应而导致免疫耐受。因此，为了提高蛋白质抗原的保护性，须在表位水平上做出选择，摒除后者，保留或改善前者以得到更理想的疫苗分子。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供Eppin的B细胞表位，具有SEQ IDNo.1所示氨基酸序列。

本发明的目的之二在于提供包含所述Eppin的B细胞表位的多重抗原肽，在由一个或多个双官能单元构成的树状核心的分枝上连接T辅助细胞表位和Eppin的B细胞表位而得到。

进一步，T辅助细胞表位与Eppin的B细胞表位分别被共价连接到树状核心的不同分枝上；

进一步，T辅助细胞表位与Eppin的B细胞表位串联，形成单体亚单位，该单体亚单位再通过T辅助细胞表位或Eppin的B细胞表位的羧基端共价连接到树状核心的分枝上，每个分枝连接一个单体亚单位；

进一步，在每个单体亚单位中，T辅助细胞表位与Eppin的B细胞表位通过柔性接头串联，所述柔性接头选自由GGG、GGS或KK组成的短肽；

进一步，所述T辅助细胞表位具有SEQ ID No.2所示氨基酸序列；

进一步，所述双官能单元选自半胱氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或鸟氨酸；

进一步，所述双官能单元为赖氨酸。

本发明的目的之三在于提供能够与所述Eppin的B细胞表位或所述包含Eppin的B细胞表位的多重抗原肽特异性结合的抗体。

本发明的目的之四在于提供所述包含Eppin的B细胞表位的多重抗原肽在制备男性避孕疫苗中的应用。

本发明的有益效果在于：本发明公开了Eppin的优势B细胞表位，具有SEQ IDNo.1所示氨基酸序列，其成分单一、结构简单、摆脱了天然蛋白抗原中不良表位的影响，引发的免疫反应针对性强；本发明还公开了包含此优势B细胞表位的多重抗原肽，在由一个或多个双官能单元构成的树状核心的分枝上连接T辅助细胞表位和此优势B细胞表位而得到；此多重抗原肽可以提高B细胞表位的免疫原性同时不影响其抗原特异性，T辅助细胞表位能刺激机体产生CD4+T细胞，从而辅助B细胞活化，使其分泌高滴度的特异地靶向所述优势B细胞表位的抗体，诱导高效、安全、可逆的抗生育作用，可用于制备男性避孕疫苗，为男性避孕的临床主动免疫治疗提供新的手段，具有重要的理论价值和广阔的应用前景，能够产生重大的社会效益和经济效益。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一步的详细描述，其中：

图1为本发明多重抗原肽首次免疫后第5周免疫雄鼠血清中特异性抗体生成情况；

图2为本发明多重抗原肽的结构示意图。