[发明专利]鼻咽癌早期血清特异蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其是涉及肿瘤标志物-鼻咽癌早期血清特异蛋白，可在体外检测鼻咽癌发生的危险性的一种方法及其应用。

背景技术

鼻咽癌是原发于鼻咽粘膜被覆上皮的恶性肿瘤，是耳鼻喉科最常见的癌症，其发病具有明显的地区性，种族和家族聚集性，好发于黄种人。中国的福建、广东等省是鼻咽癌高发的区域，发病率可达30/10万～50/10万。其症状主要表现为听力减退、咽部异物感、咽炎、舌炎、龈炎、吞咽困难、呼吸异常等。

临床研究发现，鼻咽癌的临床分期是影响治疗效果的重要因素，早期鼻咽癌(I、II期)的5年生存率(89.7％、75.9％)远比晚期(III、IV期)(51.3％、22.2％)好。因此加强鼻咽癌的二级预防，早期发现、早期诊断和早期治疗，是鼻咽癌防治工作的重要环节。目前鼻咽癌的早期筛查主要是鼻咽间接镜检查、颈部淋巴结触诊和鼻咽纤维镜，但均为体内检查，且检查繁琐，准确度也不高。现在较简便的体外检查方法是EB病毒抗体的检测，但还不成熟，灵敏度及特异性也存在较大缺陷。因此，本领域迫切需要开发新的更有效的早期检测鼻咽癌的方法。

蛋白质是生命活动的最终执行者，肿瘤细胞基因的改变最终也都会反映在蛋白质的改变上，因此在肿瘤细胞的发生、发展以及侵袭转移过程中必定伴随着蛋白质种类与数量的改变，并且这些蛋白质有可能释放入血。从理论上讲，通过检测血清中蛋白质的动态变化就有可能筛查出与肿瘤相关的蛋白质，作为疾病早期的指标对肿瘤发生的危险性进行早期评估。近几年来，蛋白质组学的快速发展使我们从血清中寻找肿瘤特异相关蛋白质成为可能，尤其是质谱技术的产生，凭借其高灵敏度、高通量、快速简便等优点，已经成为微量蛋白质检测的最重要手段之一。

SELDI-TOF-MS即蛋白质芯片和质谱技术相结合的表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪技术，该技术中的蛋白质芯片具有高度并行性、高通量、微型化和自动化等其他方法难以比拟的优越性，同时该芯片采用光敏染料标记，灵敏度高，准确性好，使筛选低丰度小分子蛋白质甚至肽成为现实，弥补了传统方法如色谱、光谱、凝胶电泳等技术的不足，对筛选和鉴定新的肿瘤相关特异性标志物产生了巨大的影响。同时，该质谱技术可以直接对血清样品进行鉴定，方便快速，半天即可得出结果，提供了临床应用的价值。

自2001年以来，应用SELDI技术对血清样品进行检测来寻找新的肿瘤标志物用于肿瘤的早期诊断，成为了肿瘤研究的热点之一。美国的多家蛋白质组学研究机构已用该技术分别对卵巢癌、前列腺癌等体液样本进行了研究，发现了新的标志物，其特异性和灵敏度均优于现有的检测方法。国内也应用该技术对肺癌、结直肠癌、乳腺癌、肝癌等部分肿瘤进行了研究，得到了一些肿瘤标志物，取得了一些成果和专利，如专利申请号为200410053632.0，200410066304.4，200510080787.8等。

结合上述情况，利用SELDI技术获取血清蛋白质标志物成为从分子水平诊断鼻咽癌发生风险性的有效途径之一。目前尚未发现与鼻咽癌相关的血清标志物或标志蛋白，因此应用质谱技术对鼻咽癌患者血清进行分析来获得特异肿瘤标志物，具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是建立一套有效的方法，用于在分离的血清中体外检测鼻咽癌发生的风险性进行评估。即应用SELDI-TOF-MS技术，通过建立鼻咽癌患者和健康对照者之间血清蛋白质的指纹图谱，并进行差异分析，寻找新的蛋白质标志物，从而对鼻咽癌进行早期筛查和检测。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：为了达到上述目的，本发明提供了一种从分离的外周血清中体外检测鼻咽癌发生危险性的方法，该方法包括下列步骤：

(a)制备鼻咽癌患者的血清样本；

(b)利用表面增强激光解吸电离飞行质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测血清样品，获得血清蛋白质谱；

(c)采用Biomarker Wizard和Biomarker Pattern软件对数据进行分析处理；

(d)确定该血清所获自的患者发生鼻咽癌的风险。

本发明所述的利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术检测步骤(a)的血清样本的条件是：使用Ciphergen Biosystems，Inc.Fremont，USA提供的PBSII-C型蛋白质芯片阅读机，设定的最适激光强度为235，检测灵敏度8。