[发明专利]鼠神经生长因子的制备方法和注射用鼠神经生长因子的制备方法

权利要求书

1.一种鼠神经生长因子的制备方法，将小鼠颌下腺组织匀浆，反复冻融破碎细胞，离心 去沉淀，得匀浆上清液；匀浆上清液去除细胞碎片后上阳离子交换层析I，收集流穿 液，流穿液进行酸化解离、离心，得酸解上清液；将酸解上清液上阳离子交换层析II， 经Tris-HCl流洗后用Tris-HCl-NaCl溶液洗脱；收集目标蛋白峰，得蛋白收集液，蛋 白收集液进行100KD超滤膜过滤后，将100KD超滤膜滤下液用注射用水或注射用生理 盐水稀释至1～40μg/ml，在55～65℃水浴中恒温1～12小时，然后经5KD超滤膜和 除菌过滤制得神经生长因子原液，其中，所述的阳离子交换层析柱I的介质为 CM-Cellulose 52或CM-Sepharose FF，阳离子交换层析柱II的介质为CM-Cellulose 52或CM-Sepharose FF。

2.根据权利要求1中所述的鼠神经生长因子的制备方法，其特征在于：100KD超滤膜滤 下液用注射用水或注射用生理盐水稀释至5～30μg/ml。

3.根据权利要求2中所述的鼠神经生长因子的制备方法，其特征在于：100KD超滤膜滤 下液用注射用生理盐水稀释至20μg/ml。

4.根据权利要求3中所述的鼠神经生长因子的制备方法，其特征在于：所述20μg/ml 100KD超滤膜滤下液在60℃±1℃水浴中恒温10小时。

5.根据权利要求1中所述的鼠神经生长因子的制备方法，其特征在于：阳离子交换层析 I流穿液用pH4.0的醋酸缓冲液进行酸化解离10分钟。

6.一种注射用鼠神经生长因子的制备方法，在注射用生理盐水中加入权利要求1～5中任 一项制得的鼠神经生长因子原液中加入赋形剂和稳定剂，除菌过滤后分装、冻干得制 品。

7.根据权利要求6中所述的注射用鼠神经生长因子的制备方法，其特征在于：赋形剂为 甘露醇，稳定剂为人血白蛋白。