[发明专利]脱水河豚毒素高纯单体的制备方法

权利要求书

1.脱水河豚毒素高纯单体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)以河豚毒素粗品为原料，醋酸水溶液为溶媒，配制成待分离制备液；

醋酸水溶液的浓度为0.01％～6.0％；待分离制备液中河豚毒素粗品的浓度为10～ 50mg/ml；

2)将待分离制备液转入制备型高效液相-质谱仪器系统的储料管中，选择流动相，启动 制备型高效液相-质谱仪器系统，进行分离纯化制备脱水河豚毒素，得脱水河豚毒素纯化液， 流动相选择醋酸体系、三氟乙酸体系或醋酸-醋酸铵体系；

醋酸体系选自醋酸水溶液、醋酸-甲醇水溶液、醋酸-乙睛水溶液中的一种；三氟乙酸体 系选自三氟乙酸水溶液、三氟乙酸-甲醇水溶液、三氟乙酸-乙腈水溶液中的一种；醋酸-醋酸 铵体系选自醋酸-醋酸铵水溶液、醋酸-醋酸铵-甲醇水溶液、醋酸-醋酸铵-乙腈水溶液中的一 种；

按质量百分比，各种流动相的浓度分别为：醋酸体系：醋酸的浓度为0.01％～1.0％；甲 醇的浓度为0～50％，乙腈的浓度为0～50％；三氟乙酸体系：三氟乙酸的浓度为0.01％～1.0％， 甲醇的浓度为0～50％，乙腈的浓度为0～50％；醋酸-醋酸铵体系：醋酸的浓度为0.01％～2.0％， 醋酸铵的浓度为0.01％～2.0％，甲醇的浓度为0～50％，乙腈的浓度为0～50％；

3)将脱水河豚毒素纯化液真空浓缩，低温结晶，干燥，得脱水河豚毒素高纯单体。

2.如权利要求1所述的脱水河豚毒素高纯单体的制备方法，其特征在于在步骤1)中， 按质量百分比，河豚毒素粗品中脱水河豚毒素的含量大于10％。

3.如权利要求1所述的脱水河豚毒素高纯单体的制备方法，其特征在于在步骤1)中， 待分离制备液进行加热转化，加热的温度为30～100℃；加热的时间为0.1～24h。

4.如权利要求3所述的脱水河豚毒素高纯单体的制备方法，其特征在于所述加热的温度 为70～90℃；加热的时间为4～8h。

5.如权利要求1所述的脱水河豚毒素高纯单体的制备方法，其特征在于在步骤2)中， 所述制备型高效液相-质谱仪器系统选用的制备柱采用C4、C8、C18或离子交换色谱柱，制 备柱的直径为10～50mm。

6.如权利要求1所述的脱水河豚毒素高纯单体的制备方法，其特征在于在步骤2)中， 将待分离制备液转入制备型高效液相-质谱仪器系统的储料管中，待分离制备液的进样量为 0.1～10.0ml/次。

7.如权利要求6所述的脱水河豚毒素高纯单体的制备方法，其特征在于所述待分离制备 液的进样量为1.0～5.0ml/次。

8.如权利要求1所述的脱水河豚毒素高纯单体的制备方法，其特征在于在步骤2)中， 流动相的流速为5.0～150.0ml/min；所述真空浓缩的温度为25～50。

9.如权利要求8所述的脱水河豚毒素高纯单体的制备方法，其特征在于所述流动相的流 速为10.0～50.0ml/min；所述真空浓缩的温度为30～40℃。

10.如权利要求1所述的脱水河豚毒素高纯单体的制备方法，其特征在于在步骤3)中， 所述低温结晶的温度为0～15℃。

11.如权利要求10所述的脱水河豚毒素高纯单体的制备方法，其特征在于所述低温结晶 的温度为2～10℃。