[发明专利]利用分子标记技术鉴定猴头菇菌种猴王的方法

说明书

技术领域  本发明涉及一种微生物的鉴定方法，具体涉及利用分子标记技术鉴定猴头菇菌种猴王的方法，属生物技术领域。

背景技术  猴头菇(Hericium erinaceus)肉嫩味美，营养丰富。很早以前，人们把它与熊掌、海参、鲨鱼翅并列为“四大名菜”，有“山珍猴头，海味燕窝”的美称，在古代被作为贡品。人体必需的9种氨基酸，猴头菇都含有。据报道，猴头菇所含有的营养成分与目前人工栽培的其它食用菌品种相比都居第一、二位，因而显得更加珍贵。

我国食用菌资源丰富，品种比较多，但是由于部分生产者有意或无意的改名，造成猴头菇的栽培菌种存在“异种同名或同种异名”的混乱现象。这种现象极大地损害了育种者和生产者的利益，不但给科学研究和学术交流带来障碍，而且对规范生产和产品质量标准的制定带来很大困难。

优质菌种在猴头菇单产和质量中的贡献举足轻重，这决定了猴头菇菌种在猴头菇产业中的重要地位。随着大规模的工厂化栽培方式的出现，对猴头菇栽培菌株质量的要求越来越高，需要更为简便、快速、准确的菌株鉴定技术，以保证每批次的用种都准确无误。

发明内容  本发明的目的是提供一种利用分子标记技术鉴定猴头菇菌种猴王的快速检测方法。

本发明的利用分子标记技术鉴定猴头菇菌种猴王的方法有2种，2种鉴定方法都包括菌丝培养与收集、基因组DNA的提取、SCAR-PCR分子标记的检测建立和SCAR-PCR产物的检测；

方法一的特征在于

1、SCAR-PCR分子标记的检测，使用的检测引物是猴王F1/R1，其中，猴王F1是5′-CTCCTCCCTTCACAATAAATAGCCA-3′’，猴王R1是5′-TCCCTGAACTTCTTTGTCTTCCCGT-3′；

2、SCAR-PCR分子标记的检测建立：SCAR-PCR扩增体系为10×PCRbuffer 2.5μl，25mmol/L MgCL₂ 1μl，2.5m mol/L dNTP 2μl，5U/ul TaqDNA Polymerase 0.3μl，10μmol/L检测引物各1μl，1ng～10ng/μl模板DNA 1μl，ddH₂O 16.2μl；

SCAR-PCR反应条件为94℃ 1min；94℃ 45second，62℃ 45second，72℃ 1min，30个循环；72℃ 5min；

3、SCAR-PCR产物的检测结果：在电泳检测的DNA图谱中显示，扩增出的分子量为1012bp的特异DNA条带，为猴头菇菌种猴王的标志。

方法二的特征在于：

1、SCAR-PCR分子标记的检测，使用的检测引物是猴王F2/R2，其中，猴王F2是5′-CCCTCCACAACCACCACAAGATAAT-3′，猴王R2是5′-CTCCTCGCCGTCTGCATAAGAACTC-3′；

2、SCAR-PCR分子标记的检测建立：SCAR-PCR扩增体系为10×PCRbuffer 2.5μl，25mmol/L MgCL₂ 1μl，2.5m mol/L dNTP 2μl，5U/ul TaqDNA Polymerase 0.3μl，10μmol/L检测引物各1μl，1ng～10ng/μl模板DNA 1μl，ddH₂O 16.2μl；

SCAR-PCR反应条件为94℃ 1min；94℃ 45second，67℃ 45second，72℃ 1min，30个循环；72℃ 5min；

3、SCAR-PCR产物的检测结果：在电泳检测的DNA图谱中显示，扩增出的分子量为371bp的特异DNA条带，为猴头菇菌种猴王的标志。

本发明提供的利用分子标记技术鉴定猴头菇菌种的方法，具有灵敏度高，所需要的DNA用量少，与常规形态学检测、拮抗试验、出菇试验相比，具有检测时间短、准确性高、容易判断、重复性好等优点。具体如下：

1、检测时间短：该检测方法所需时间只需要2—3天，而常规的拮抗试验所需时间至少需要两周时间，常规形态学检测和出菇试验则需要至少2个月的时间。