[发明专利]一种高效低毒的载蓖麻毒素A链超声微泡及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及载蓖麻毒素A链超声微泡及其制备方法，将超声微泡作为抗肿瘤生物毒素 的运载工具，尤其涉及一种载蓖麻毒素A链的新型共聚物超声微泡及其制备，该载药微泡 可以通过声像图引导，并应用一定能量超声使载药微泡在肿瘤部位破裂释放出蓖麻毒素， 顺着通透性增高的细胞膜进入细胞内，达到肿瘤靶向治疗的目的。

背景技术：

常规超声造影剂是一种微米级造影剂，微泡的平均直径约2～4μm，不透过血管，是一 种血池显像剂。近年来研究发现，微泡超声造影剂作为一种新型的药物载体，不仅可以增 强超声显像，还具有分子成像、促进血栓溶解、促进基因转染及药物体内运输定点释放等 作用。

超声波为正负压交替的疏密机械波，在声场中微泡造影剂随着声压的交变不断地被动 压缩和膨胀，当声强达到一定阈值时，微泡瞬间破裂产生“空化效应”。空化效应瞬间产 生的“休克波”可使直径＜7μm的毛细血管破裂，临近组织细胞膜上出现可逆性微孔， 细胞膜通透性增高，细胞对大分子物质短暂开放即“声孔效应”。如果将包裹有药物的微 泡经静脉注射后，在治疗部位或肿瘤局部经体表给予一定能量的超声辐照，可使微泡在局 部破裂，释放出其所包裹的药物。但目前所采用的药物多为临床上使用的抗肿瘤药物，在 微泡释放后，部分药物可能随血液循环进入全身，仍将造成一定毒副作用。

蓖麻毒素是一种糖蛋白异二聚体，两条多肽链分别称为A链和B链。A链是活性链，具 有抑制细胞蛋白质合成的N-糖苷酶的活性部位；B链是一半乳糖特异的凝集素，和细胞表 面的受体结合后，整个蓖麻毒素分子通过受体介导的内吞途径进入细胞，A链在胞浆内催 化核糖体60S亚基失活，从而抑制细胞蛋白质的合成，最终导致细胞死亡，是迄今为止抗 肿瘤活性最强的天然产物之一。但由于蓖麻毒素B链与细胞膜表面受体的结合缺乏特异性， 蓖麻毒素在全身用药抗肿瘤的同时常导致正常细胞的死亡，产生严重的毒副作用。如果单 纯使用蓖麻毒素A链，由于缺乏B链的引导，A链难以进入细胞内产生细胞毒活性，其活 性通常比完整的蓖麻毒素小105～106倍。

采用微泡包载蓖麻毒素A链，结合超声辐照，将A链释放到病变部位，并通过超声辐 照后通透性增高的细胞膜进入肿瘤细胞内发挥抗肿瘤作用。而在非超声辐照部位，A链则 难以通过完整的细胞膜进入胞内产生细胞毒作用。这样，通过超声触发微泡靶向定点释放 蓖麻毒素A链既可明显增强病变部位抗肿瘤效应，又可显著减轻全身毒副作用，真正达到 肿瘤靶向治疗的目的。

发明内容：

本发明的目的是提供一种高效低毒的载蓖麻毒素A链超声微泡及其制备方法，从而由 超声造影剂微泡携带蓖麻毒素A链，在声像图引导下，用一定能量的超声辐照使之在肿瘤 局部破裂，定点释放药物，并协助药物进入细胞内，达到靶向治疗肿瘤的目的。

本发明采用的技术方案是将蓖麻毒素A链与各种超声微泡结合。所述结合包括蓖麻毒 素A链包裹于微泡内或吸附于微泡表面而制得载蓖麻毒素A链超声微泡。所述的载蓖麻毒 素A链超声微泡可采用水/油/水复乳-溶剂挥发法制备成的载蓖麻毒素A链的 PLGA-PEG-PLGA微泡，或者也采用二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、司班、 甘油、磷酸盐缓冲液与蓖麻毒素A链混合制得的载蓖麻毒素A链的脂质超声造影剂微泡。

本发明所使用的蓖麻毒素A链可以采用基因重组的方法制备或现代色谱方法纯化，而 其中以基因重组方法制备为优选。采用基因工程方法制备的蓖麻毒素A链，在原核系统进 行表达时，由于缺乏糖基化，蛋白质第10个氨基酸残基无寡糖链连接，不容易被降解， 体内半衰期明显延长，更有利于发挥其抗肿瘤作用。

本发明所述超声造影剂微泡包括：高分子材料超声造影剂微泡、脂质超声造影剂微泡、 人血白蛋白超声造影剂微泡。具体如下：

(1)高分子材料超声造影剂微泡：包括微泡壳成分中含有各种高分子作为成膜材料 的超声微泡。所用的高分子材料具体包括：聚乙二醇、乳酸/羟基乙酸共聚物、或其二元 或三元嵌段共聚物、接枝共聚物、氰基丙烯酸酯等。应用高分子聚合物材料制备的超声微 泡具有许多优点，多数聚合物材料均具有较高的稳定性和可塑性；通过改变聚合物的组成 比例、分子量以及制备工艺等条件可调节材料的柔顺性，控制壳的厚度、弹性、粒径分布， 进而调节其声学特性和声学效果持续时间；制备的微泡直径小、分布均匀、半衰期较长。