[发明专利]基于羧甲基壳聚糖的基因递送载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.基于羧甲基壳聚糖的基因递送载体，其特征在于为羧甲基壳聚糖和硅烷组成的有机-无机纳米杂化材料，其结构式如下：

其中R＝C₈H₁₁O₆，为羧甲基壳聚糖分子单元。

2.如权利要求1所述的基于羧甲基壳聚糖的基因递送载体，其特征在于按质量比，羧甲基壳聚糖∶硅烷＝1∶1～3。

3.如权利要求1所述的基于羧甲基壳聚糖的基因递送载体，其特征在于所述的硅烷为3-(2，3-环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷。

4.如权利要求1所述的基于羧甲基壳聚糖的基因递送载体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)采用碱溶液作为溶剂制备羧甲基壳聚糖溶液，按质量百分比，羧甲基壳聚糖的含量为0.08％～1％；

2)在羧甲基壳聚糖溶液中加入硅烷，得到反应液；

3)将反应液于25～60℃加热搅拌至整个体系呈现乳光并乳光颜色不再加深，得到乳白色悬浮液；

4)将悬浮液离心分离，收集白色沉淀并用蒸馏水洗涤，冷冻干燥后得到羧甲基壳聚糖—硅氧烷纳米杂化材料，即为基于羧甲基壳聚糖的基因递送载体。

5.如权利要求4所述的基于羧甲基壳聚糖的基因递送载体的制备方法，其特征在于所述碱溶液为氨水。

6.如权利要求4所述的基于羧甲基壳聚糖的基因递送载体的制备方法，其特征在于所述硅烷为3-(2，3-环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷。

7.如权利要求1所述的基于羧甲基壳聚糖的基因递送载体用于与外源基因结合实现对DNA的运输和表达。

8.如权利要求7所述的用于与外源基因结合实现对DNA的运输和表达的具体步骤如下：

1)将羧甲基壳聚糖—硅氧烷纳米杂化材料悬浮于医用酒精中，离心分离，得无菌的羧甲基壳聚糖—硅氧烷纳米杂化材料；

2)将无菌的羧甲基壳聚糖—硅氧烷纳米杂化材料悬浮于无菌水中，超声分散，加入无菌的外源基因，按质量比，无菌的羧甲基壳聚糖—硅氧烷纳米杂化材料的纳米颗粒：外源基因为50～200∶1，得复合溶液；

3)将复合溶液涡旋，静置，得载有外源基因的羧甲基壳聚糖—硅氧烷纳米杂化材料的悬浮液；

4)收集悬浮液中的沉淀，得载有外源基因的羧甲基壳聚糖—硅氧烷纳米基因载体。

9.如权利要求8所述的用于与外源基因结合实现对DNA的运输和表达，其特征在于外源基因为双链环状质粒DNA，单链反义寡核普酸或RNA。

10.如权利要求8所述的用于与外源基因结合实现对DNA的运输和表达，其特征在于涡旋的温度为4～40℃，涡旋的时间为10～50s，静置的时间至少30min。