[发明专利]用单一培养基生产罗汉果组培苗的方法

说明书

技术领域

本发明属用单一培养基生产罗汉果组培苗的方法。

技术背景

罗汉果Siraitia grosvenori(Swingle)C.Jeffrey，又叫汉果、拉汗果、长寿果、神仙果、罗晃子、假苦瓜、光果木鳖等，为葫芦科Cucurbitaceae罗汉果属Siraitia Merr多年生草质藤本，雌雄异株植物，我国原产，也是我国、更是广西最重要的传统特产中药材之一，在医疗与保健方面有很高的应用价值和广泛的开发前景。在广西桂北地区多把罗汉果作为支柱产业发展。广东、江西、湖南、贵州等省的部分市县也在积极发展罗汉果种植。由于组培苗可以在平地种植，打破了千百年来罗汉果只能在一定海拔的山坡种植的传统，而且在种植过程中能有效控制病害、尤其是病毒的传播，可实现当年栽种当年结果，适宜规模化种植，近年来在罗汉果种源供应市场中已经占据绝对的主导地位。但是，从上世纪末罗汉果组培苗商品化以来，罗汉果组培苗的生产单位几乎无一例外地都选用细胞分裂素中的6-BA(N⁶-BA，N⁶-苄基腺嘌呤)作为主导生长调节剂。然而6-BA却不能单独使用，还必须再添加IAA(吲哚乙酸)、NAA(萘乙酸)或IBA(吲哚丁酸)等生长素类调节剂，分别复配成“腋芽外植体启动”、“增殖扩繁”和“增殖苗生根”等三种成分各不相同的培养基才能完成全部组培苗生产程序。更麻烦的是，6-BA在罗汉果组培中的生物学效应与其在其他植物组培中有显著不同，只要是在有效使用浓度内，就会难以避免地诱导大量愈伤组织的发生，并且出现在组培苗生产的全过程。从遗传学考虑，大量愈伤组织的发生会影响组培苗的遗传稳定性，最终导致各种劣质变异和大田栽培中不良事件(如抗性低下、不能正常开花结果等)的发生，给组培苗的生产者和种植者都带来极大的潜在风险和损失。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用单一培养基完成罗汉果组培苗生产的方法。

本发明以如下技术方案解决上述技术问题：

将狭霉素0.1～0.5mg·L^-1加入到常规MS固体培养基中进行罗汉果组培苗生产。

由于单用狭霉素配制成的培养基可以同时用于“腋芽外植体启动”、“增殖扩繁”及“增殖苗生根”各技术环节，从而使得罗汉果组培苗的生产操作程序大为简化。特别是狭霉素能有效控制罗汉果组织培养过程中愈伤组织的发生，有利于遗传稳定性，从而提高组培苗的质量。

具体实施方式

申请人经多年反复研究，利用狭霉素同时具有植物细胞分裂素和生长素两类生长调节剂生物活性的特性，发现将狭霉素0.1～0.5mg·L^-1添加到MS(Murashige-Skoog)固体培养基中，无需再添加任何其他激素或调节剂，就能促进罗汉果腋芽外植体正常萌发生长，并诱导不定根发生，同时显著抑制和推迟愈伤组织的形成。因此，用MS+狭霉素0.1～0.5mg·L^-1这种单一的培养基就能替代常规用的三种培养基才能完成的罗汉果组培苗生产全过程。既可简化生产程序，又能提高组培苗质量。

以下是分别用单一培养基和常规的三种培养基进行罗汉果组培苗生产的方法和结果比较：

1.在“腋芽外植体启动”期：

除了培养基成分不同外，用单一培养基和常规的三种培养基进行罗汉果组培苗生产的培养条件都相同，具体为：

从防虫网内的无病毒健康植株的2级或3级侧蔓上采取带腋芽的单节茎段作外植体，按照植物组织培养的常规操作程序，分两组分别作两种不同培养基的实验。每组30瓶，每瓶1个外植体。两组培养基均含蔗糖3％，琼脂粉4.5g·L^-1，调pH 5.8～6.2。培养温度：昼/夜28/22(±2)℃，光照15001x，11h/d。

结果是：

(1)培养基是MS+狭霉素0.1～0.5mg·L^-1的一组，培养20～25d，成苗率达80～100％，茎叶形态正常，株高达3～4cm，且很少发生愈伤组织。培养至15～25d，就陆续有不定根发生，建成完整植株。

(2)培养基是MS+6-BA0.1～0.5mg·L^-1的一组，培养20～25d，，成苗率仅20～30％，而且叶片奇小，不能正常建成，需再添加适量IAA等生长素，才能使叶片正常建成，同时有大量愈伤组织发生，却很难有不定根发生。

2.在“增殖扩繁”期：