[发明专利]一种测定葡萄糖的纳米金催化共振散射光谱法

说明书

技术领域：

本发明涉及葡萄糖的测定方法，具体地说是一种测定葡萄糖的纳米金催化共振散射光谱法。

背景技术：

葡萄糖是生命活动中不可缺少的物质，它在人体内能直接参与新陈代谢过程，在消化道中，葡萄糖比任何其他单糖都容易被吸收，而且被吸收后能直接为人体组织利用，具有补充体液、供给能量、补充血糖、强心利尿、促进解毒功能，对癌症也有一定治疗作用。此外，葡萄糖还用在印染制革、制镜工业和热水瓶胆镀银工艺中。目前，葡萄糖的检测方法主要有高效液相色谱法、酶催化法、斐林法等。前二种方法或仪器成本较高或使用较昂贵的酶试剂；虽然准确度较高，但要求在沸腾状态下滴定，操作不便且选择性不高。因此，建立一种简便快速、选择性较好、低成本的葡萄糖检测方法是非常有意义的。

近年来，金属纳米粒子的催化性能研究及应用是一个十分活跃的研究领域。贵金属金曾被认为是催化活性极低的元素，但近来发现小粒径的纳米金具有很好的催化性能。1939年James等人发现硝酸银在胶体金表面被对苯二酚还原，胶体金起到了催化作用；Dansher建立了用银显影液增强光镜下金颗粒可见性的金银染色法；1983年Holgate等人进一步把这个发现运用到组织学的研究中去，创立了免疫金银染色法。金催化金增强引起了人们浓厚的研究兴趣，它极大地提高了检测信号并避免了银增强带来的问题。此外，还可用作为标记物金纳米粒子催化金增强检测DNA和人免疫球蛋白G。近来，Mao等人将纳米金催化铜增强用于检测人免疫球蛋白G，结果同样满意。铜增强试剂易制备、易保存及稳定性好，有广泛的应用前景。共振散射光谱法具有简便、快速、灵敏等特点，已用于无机物、有机物、蛋白质、核酸等分析。迄今为止有关纳米金催化共振散射光谱法检测葡萄糖的方法尚未见报道。

发明内容：

本发明的目的是要为克服现有技术的不足，而公开一种操作简便、快速、且灵敏度高、成本低的测定葡萄糖的纳米金催化共振散射光谱法。

本发明测定葡萄糖的纳米金催化共振散射光谱法包括以下步骤：

1、制备已知葡萄糖浓度的测试体系：

(1)在具塞比色管中，依次移取0.8-1.0mg.mL^-1硫酸铜溶液，10-12mg.mL^-1斐林试剂A(以氢氧化钠计)，1.912-3.0μg.mL^-1金胶，一定量的浓度为1mg.mL^-1葡萄糖，0.60-0.72mg.mL^-1溴化钾溶液，定容至一定体积，于75℃水浴槽内反应8-10min；

(2)反应完成后将试管放入冷水中冷却至室温终止反应；

(3)用荧光分光光度计，设置电压450V，激发狭缝＝发射狭缝＝2.5nm，同步扫描激发和发射波长(λ_em-λ_ex＝0nm)得到体系的RSS光谱。在610nm处测定体系的散射光强度；

2、依据步骤一的方法制备试剂空白体系：求得试剂空白体系的(I_610nm)_b；

3、计算ΔI_610nm＝I_610nm-(I_610nm)_b值；

4、以加入的葡萄糖浓度C为横坐标，ΔI为纵坐标，绘制工作曲线；

5、依照步骤一的方法制备检测体系：其中加入的是未知葡萄糖浓度的被测物，求被测物的ΔI；

6.根据工作曲线，即可求得被测样品中葡萄糖在一定线性范围内的浓度，其工作曲线为ΔI_610nm＝7.830C-60.60，相关系数为0.9959，检出极限为8μg.mL^-1。

步骤1所述的具塞试管为5mL的具塞试管，依次加入的硫酸铜溶液最佳浓度为0.828mg.mL^-1，斐林试剂A(以氢氧化钠计)最佳浓度为11mg.mL^-1，金胶最佳浓度为1.91μg.mL^-1，1mg.mL^-1葡萄糖用量为50μL～120μL，溴化钾溶液最佳浓度为0.72mg.mL^-1，定容体积为2.5mL，水浴温度为75℃，最佳水浴反应时间为9min；

所述的冷却方式为流水冷却；

所述的共振散射测定波长为610nm；

所述的测定葡萄糖的线性范围为20～48μg.mL^-1。