[发明专利]褐色喜热裂孢菌木糖异构酶在酿酒酵母中的活性表达与应用

权利要求书

1、一种褐色喜热裂孢菌木糖异构酶的提取方法，其特征在于所述的木糖异构酶的基因选自褐色喜热裂孢菌，提取方法包含以下步骤：

首先设计正向引物5’-ACTCATATGAAATCTAAAAGATTCCAAGTAT-3’，反向引物5’-ATAGGATCCTTACTCTTCTATTCTTAATTTATTT-3’，从基因组里经聚合酶链式反应获得褐色喜热裂孢菌基因，然后对前述反应产物进行初步纯化，并利用EcoRI和HindIII对反应产物进行双酶切，再与同样经双酶切的穿梭载体pYES2质粒连接，获得表达质粒pYES2-xylA。

2、根据权利要求1所述方法提取的褐色喜热裂孢菌木糖异构酶，其特征在于所述木糖异构酶的分子量为43KD，酶的最适反应温度为80～85℃，酶的最适反应pH是7.0。

3、根据权利要求1所述方法提取的褐色喜热裂孢菌木糖异构酶在酿酒酵母中的活性表达方法，其特征在于所述活性表达方法包含以下步骤：

制备酿酒酵母菌Sc的感受态细胞，然后用重组质粒pYES2-xylA电转化Sc的感受态细胞，得重组酿酒酵母菌Sc/p YES2-xylA，在可使木糖异构酶基因表达的条件下培养该重组菌，把细胞破碎后所得粗酶液用果糖做底物，在酶的合适条件下反应进行酶活力测定。

4、根据权利要求1所述方法提取的褐色喜热裂孢菌木糖异构酶在酿酒酵母发酵产物中的应用。