[发明专利]一种富集分离香椿叶黄酮类物质的方法

说明书

技术领域

本发明属双水相体系富集分离香椿叶黄酮类物质的方法。

背景技术

香椿[Toona sinensis(A.Juss.)Roem]又名春芽树、椿、椿树，在《植物名实图考》中称为红椿，属楝科(Meliaceae)香椿属落叶乔木，是我国特有珍贵速生材、菜、药多用途树种，落叶乔木，树冠庞大，叶繁茂，树干通直，生长迅速。香椿具有很高的药用价值，《本草纲目》中指出，香椿的叶、芽、根、皮和果实均可入药。现代医学实验研究表明香椿叶提取物体内有调节脂质代谢、缓解高血糖症、增进精子活力、延缓肝纤维化、诱导癌细胞凋亡和抑制肉瘤生长等作用。此外香椿叶提取物还有体外抗氧化、抗菌和对害虫的毒杀、拒食或驱避活性等作用。香椿叶主要有效成分之一为黄酮类化合物，主要以苷的形式存在，已发现的黄酮类化合物主要有槲皮素-3-0-葡萄糖苷、槲皮素-3-0-鼠李糖苷、槲皮素-3-0-葡萄糖苷(6-1)鼠李糖、山萘酚-3-0-葡萄糖苷、山萘酚-3-0-阿拉伯糖、6，7，8，2′-四甲氧基-5，6′-二羟基黄酮、5，7-二羟基-8-甲氧基黄酮等，所含黄酮醇苷的苷元主要是槲皮素、山萘酚，与银杏叶所含黄酮苷元大致相同，而且同季节香椿叶中总黄酮苷元含量比银杏叶中的含量高出2-3倍。

黄酮类化合物具有广泛的生物活性，如保肝、抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化作用以及对心血管的作用和雌激素样作用。植物中黄酮类化合物现有的提取富集分离方法主要有有机溶剂萃取、大孔树脂吸附等方法，也有用双水相和超滤方法的报道。

目前用于富集分离黄酮类化合物的双水相体系，多是聚乙二醇(PEG)-盐双水相体系、聚乙二醇(PEG)-K₂HPO₄-H₂O双水相体系、聚乙二醇(PEG)-硫酸铵-H₂O双水相体系等；也有用环氧乙烷(EO)和用环氧丙烷(PO)的无规共聚物(EOPO)/混合磷酸钾(KHP)双水相体系、丙酮-K₂HPO₄双水相体系的。

高聚物与盐形成的双水相富集分离黄酮类物质时，黄酮类化合物在大分子高聚物相富集，为回收大分子高聚物，还需采用萃取或超滤的方法将黄酮类化合物中的大分子高聚物提出，不仅技术上比较麻烦，而且因大分子高聚物的价格较高，导致提取黄酮类物质的成本较高。用丙酮-K₂HPO₄双水相体系富集分离黄酮类物质时，黄酮类化合物在丙酮相富集，丙酮虽是小分子，相对大分子高聚物也较易回收，但丙酮有低毒且价格贵，残存在产物中影响产品的安全。因此有必要研究一种产品的安全性高、生产成本低的富集分离黄酮类物质的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种产品的安全性高、生产成本低、适合产业化开发的富集分离香椿叶黄酮类物质的方法。

本发明以如下技术方案解决上述技术问题：

将香椿叶干燥、粉碎、乙醇回流提取、过滤除杂浓缩得香椿叶粗提液的浓缩液，用双水相体系富集分离此浓缩液中的黄酮类物质，上相液处理后真空干燥得到香椿叶黄酮类物质；其特征是取上述香椿叶粗提液的浓缩液，按以下比例加入硫酸铵和乙醇：浓缩液体积占浓缩液和乙醇体积之和的70～90％；液体体积mL∶硫酸铵质量g为100∶15～31；加热至40℃～45℃，混匀，静置1～3h，分为上、下两相，将上相、下相分开，下相降温、结晶，过滤得硫酸铵晶体供循环使用；上相液加无水乙醇沉淀除残存杂质后回收乙醇，上清液浓缩真空干燥即得香椿叶黄酮类物质。

应用乙醇-硫酸铵双水相富集分离香椿叶黄酮类化合物，具有明显的优点：

(1)分相迅速

在实验中观察到，采用乙醇-硫酸铵双水相富集分离法，香椿叶粗提液的浓缩液、硫酸铵和乙醇按合适比例加入加热，混匀后，约10分钟左右即可分相(不需要离心分离)，且没有乳化层，缩短了实验周期。

(2)过程集成

乙醇-硫酸铵双水相富集分离既达到了初步纯化的目的，又浓缩了料液。表现为杂质(如亲水性物质糖、蛋白质等)进入下相，黄酮类物质富集在上相，上相较原始处理液减少，黄酮浓度和纯度都提高。

(3)降低物耗

本发明方法用乙醇作为双水相的有机溶剂，毒性小，乙醇和硫酸铵容易回收利用，大大降低了原材料的消耗。

(4)用本发明的方法香椿叶黄酮类物质的回收率高，生产方法简单，易于掌握，不受环境影响；成本低廉，适合产业化生产。

具体实施方式