[发明专利]一种从啤酒花中提取黄腐酚的方法

说明书

技术领域

本发明涉及黄腐酚(xanthohumol)的提取，具体是一种从啤酒花中提取黄腐酚的方法。

背景技术

啤酒花(Humunus Lupulus L)是桑科葎草属多年生草质蔓生藤本，雌雄异株，花单性，雌性球穗花序简称酒花。酒花主要用作啤酒酿造原料，赋予啤酒苦味和香味及防腐作用，其有效成分为酒花树脂、酒花油和多酚。黄腐酚(xanthohumol XN)是啤酒花中的一种黄酮类物质，为酒花异戊二烯基查耳酮，其化学结构如下：

近年来对黄腐酚的研究备受关注，发现黄腐酚有着多种有益作用，如抗艾滋病毒、抗癌、抗氧化、抗炎、雌激素作用等，由于其重要的生物活性，急需要大量的纯品进行深入的研究，而目前国内还没有黄腐酚标准品，国外也极少且价格相当昂贵，如何高效、简便、快速地从啤酒花中提取分离到高纯度的黄腐酚是人们关注的课题。

CN 1459281公开了一种用70％乙醇浸提啤酒花并经硅胶柱层析提纯酒花查尔酮(黄腐酚)的方法。该方法所使用的硅胶固定相对样品有不可逆吸附作用，导致黄腐酚损失较多，从啤酒花中提取分离黄腐酚的得率较低。

发明内容

本发明的目的是提供一种从啤酒花中提取黄腐酚的方法，该方法黄腐酚得率高、纯度高。

本发明提供的一种从啤酒花中提取黄腐酚的方法，包括如下步骤：

(1)将啤酒花粉碎；

(2)将100g粉碎的啤酒花用800-2000mL石油醚(沸程为60～90℃)回流提取，提取温度60-65℃，提取时间0.5-1小时，过滤除去石油醚溶液(随之除去啤酒花中的脂溶性成分)，重复提取2-3次，得到脱脂啤酒花；

(3)将上述脱脂啤酒花用800-2000mL体积浓度90～100％的乙醇进行超声提取，超声功率200W，提取温度55-65℃，提取时间30-50分钟，提取液过滤，重复提取2-3次，合并滤液、减压浓缩至稠膏；

(4)在上述稠膏中加入250-350mL乙酸乙酯，搅拌，溶解后加入150-250mL水进行分配，静置分层，分离两相，弃去水相(除去极性杂质)，乙酸乙酯相重复加水分配2-3次，而后乙酸乙酯相减压浓缩，真空干燥，得黄腐酚粗提物；

(5)将上述黄腐酚粗提物进行第一步高速逆流色谱分离，分离溶剂体系为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，其体积比为5∶4∶4.8∶4，上相为固定相，下相为流动相，按紫外检测图谱收集目标流分；

(6)将目标流分真空浓缩回收溶剂后，进行第二步高速逆流色谱分离，分离溶剂体系为正己烷-正丁醇-甲醇-水，其体积比为3.6∶1∶1.8∶3，上相为固定相，下相为流动相，按紫外检测图谱收集黄腐酚流分，真空浓缩、冷冻干燥得到粉末状黄腐酚。用高效液相色谱法(HPLC)分析其纯度，达98％以上，得率达0.17％(g黄腐酚/100g酒花)以上。

所述的步骤(2)中提取温度优选为63℃，提取时间优选为45分钟。所述的步骤(3)中提取温度优选为60℃，提取时间优选为40分钟。

以黄腐酚标准品(购自ALEXIS公司，瑞士，纯度98％以上)作参比，对本发明得到的样品进行紫外光谱、HPLC和红外光谱的定性鉴定，证明其为黄腐酚(见图4、图5、图6)。

与现有技术相比本发明的优点和效果：本发明先将啤酒花脱脂、再除去极性杂质，然后采用高速逆流色谱(HSCCC)液-液分配技术提取得到黄腐酚，提取过程中不使用固体支撑体或载体，克服了传统分离方法对样品的不可逆吸附作用，使得样品回收率高，从啤酒花制备黄腐酚得率高，达到0.17％以上，制备的黄腐酚纯度高，达98％以上。

附图说明

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细说明。

图1为实施例1步骤(5)中经第一步分离的HSCCC分离图谱

图2实施例1步骤(6)中经第二步分离的HSCCC分离图谱

图3为图2中XN(黄腐酚)峰的HPLC分析图谱

图4为本发明黄腐酚样品和标准品的紫外-可见扫描图谱

图5为本发明黄腐酚样品与标准品的红外图谱

图6为本发明黄腐酚样品和标准品的HPLC图谱

具体实施方式

实施例1

(1)取啤酒厂的酿造颗粒啤酒花用植物粉碎机粉碎成粉状；

(2)将上述100g粉粹的啤酒花用1000ml石油醚(沸程60～90℃)水浴回流提取啤酒花中的脂溶性成分，提取温度63℃，提取时间45分钟，重复提取2次，过滤分离石油醚溶液，得到脱脂啤酒花；