[发明专利]一种用于原产地人参保护的HPLC指纹图谱鉴别方法

权利要求书

1.一种用于原产地人参保护的HPLC指纹图谱鉴别方法，其特征在于包括如下步骤：

A、建立原产地人参的液相色谱指纹图谱

以同一原产地的人参为标准品，通过液相色谱分析建立其指纹图谱；

B、检测样品

取待检测的人参样品分别用与标准品相同的条件检测，得出检测样品的谱图，将两者的指纹图谱用直接观察法或指纹图谱软件分析作为定性依据；

其中：

A、对照品溶液的制备

精确称取人参皂苷Re对照品适量，加甲醇溶解制成1.00mg/mL的对照品溶液；

B、标准品溶液的制备

将同一产地的人参标准品置于60℃干燥箱中加热4小时至恒重，粉碎过筛，收集80目以下的粉样；

准确称量2.0g人参粉样加入自动控温溶剂回流液固提取器，加入100mL甲醇提取5h，提取液旋转蒸发，回收溶剂，浓缩液倒入10mL容量瓶中；

用甲醇清洗旋转蒸发器内壁，每次2ml，共清洗3次，清洗液也倒入容量瓶中并稀释至刻度，0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为标准品溶液； 

C、指纹图谱建立与分析

液相色谱条件：

色谱柱：Inertsil ODS-3，250mm×4.6mm，5μm；

检测波长：203nm；

流动相：乙腈-0.05％磷酸水溶液梯度洗脱；

流速：1mL/min；

洗脱程序：0～7min：乙腈0％，7～10min：乙腈变至10％，10～30min：乙腈变至30％，30～40min：乙腈变至35％，40～45min：乙腈变至50％，45～60min：乙腈变至70％，60～90min：乙腈变至90％；

进样量：20μL；

柱温：30℃；

精密吸取标准品溶液和对照品溶液适量，注入液相色谱仪，记录90min的色谱图，根据多批样品的指纹图谱给出的相关参数，所有组分在90min全部出峰，选取分离度以及峰形均较好的15min～90min峰，作为标准品指纹图谱，确定其中11个峰为共有特征峰，其中，根据保留时间和峰高加高法确定3号峰为人参皂苷Re，将其作为内参比峰；

D、取市售的人参样品分别用与标准品相同的条件处理和测定，得出检测样品的液相色谱指纹图谱，将两者的指纹图谱相比较或用中药色谱指纹图谱相似度评价系统导入进行分析作为定性依据，如果两者相似度小于90％即可认为非同一产品，相似度大于90％即认为是同一产品。