[发明专利]核酸回收方法及核酸回收装置

说明书

技术领域

本发明涉及从结合有核酸的固相上洗提核酸，并将核酸回收到溶液中的核酸回收方法及核酸回收装置。

背景技术

核酸是携带遗传信息的物质，在学术研究或医疗等多个领域中实施核酸的分析。作为核酸的分析方法，经常利用PCR(Polymerase Chain Reaction)等为主的核酸扩增技术。在进行以PCR等为代表的核酸分析时，为了达到不含对分析反应有干扰物质的状态，需要从生物试样等中提取·精制核酸。

作为从生物试样等中提取核酸的方法，有使用苯酚或氯仿等剧毒物，进行乙醇沉淀等操作的以往方法，但近年，通常采用的方法是，在离液物质的存在下利用核酸结合在含二氧化硅的固相等上的性质的方法。

例如，非专利文献1(J.Clin.Microbiol.，28(3)，495-503(1990))中记载的方法，由以下工序构成：(1)向含有核酸的生物试样中混合含有离液物质的溶解液和含二氧化硅的固相，使核酸结合在固相的工序；(2)利用含有离液物质的洗液来洗涤核酸和固相的复合体的工序；(3)利用含有乙醇的洗液来洗涤核酸和固相的复合体的工序；(4)利用含有丙酮的洗液来洗涤核酸和固相的复合体的工序；(5)加温核酸和固相的复合体，来干燥残留的洗液的工序；(6)从含二氧化硅的固相上洗提核酸的工序。在本方法中，为了洗涤核酸和固相的复合体，依次使用含有离液物质的洗液，接着使用含有乙醇的洗液，然后使用含有丙酮的洗液，之后，加温核酸和固相的复合体来干燥除去残留的洗液(主要是丙酮)。

但是，该方法需要多个用于洗涤核酸和固相的复合体的洗液，而且也需要加热干燥这样的工序，因此存在的问题是，不仅非常麻烦，而且需要很长时间才能得到精制的核酸。此外，在该方法中，用于促进有机溶剂干燥的加温操作也存在由于有机溶剂具有易燃性而存在危险性这样的问题。

另外，专利文献1(日本特开平11-146783)中记载了以下方法。该方法由以下工序构成：(1)向含有核糖核酸的试样中混合含有离液物质的溶解液和含二氧化硅的固相，使核酸结合在固相的工序；(2)利用含有离液物质的洗液来洗涤核酸和固相的复合体的工序；(3)利用包含水或低盐浓度缓冲液的洗液来洗涤核酸和固相的复合体的工序；(4)使包含水或低盐浓度缓冲液的洗提液与核酸和固相的复合体接触并加热，将核酸从含二氧化硅的固相中洗提的工序。该方法虽然利用不含有乙醇等有机溶剂的洗液，来实施洗涤工序，但是，其基于核糖核酸和固相的结合牢固的特性，存在不适用于脱氧核糖核酸的问题。另外，在该方法中，洗液中所含有的离液物质的残留也是个问题。

此外，专利文献2(日本特开平11-127854)中记载了以下方法。该方法由以下工序构成：(1)促进核酸从含有核酸的试样中游离的工序；(2)混合促进游离核酸与固相结合的物质的工序；(3)使混合液与含二氧化硅的固相接触，使核酸结合于固相的工序；(4)从混合液中分离核酸和固相的复合体的工序；(5)利用含盐溶液来洗涤核酸和固相的复合体的工序；(6)从固相洗提核酸的工序。但是，该方法中记载，在(5)的工序中使用含有乙醇的有机溶剂的洗液，需要用于除去乙醇的处理。另外，在该方法中，并没有研究在(5)的工序中使用的洗液所含有的盐，在精制的核酸溶液中可含有到什么程度。

专利文献1：日本特开平11-146783号公报

专利文献2：日本特开平11-127854号公报

发明内容

发明要解决的问题

如上所述，虽然有技术是以洗涤核酸和固相的复合体，然后，在实施从固相洗提核酸的工序时完全除去洗液的成分来作为课题，但是，完全除去洗液的成分困难，并且是非常费功夫的操作。因此，本发明的目的是提供一种不用完全去除洗液的成分，就能回收精制的核酸的回收方法以及核酸回收装置。

解决问题的手段

达成上述目的的本发明涉及的核酸回收方法为，使结合有核酸的固相与洗液接触来洗涤该固相，所述洗液含有构成反应液的成分中的至少一种成分，所述反应液能够应用于使用核酸的反应，从上述固相分离上述洗液，使上述洗液残留规定的量，然后，使上述结合有核酸的固相与洗提液接触，将核酸回收于该洗提液中。

本发明核酸回收方法中的洗提液与残留于上述固相的洗液合并，理想情况是形成能够应用于使用上述核酸的反应的反应液的组成。另外，在本发明涉及的核酸回收方法中，核酸洗提于上述洗提液中后，与上述残留于固相的洗液合并，还可以添加成分以使其成为能够应用于使用上述核酸的反应的反应液。在本发明涉及的核酸回收方法中，可以进一步包含固相与含有核酸的溶液接触从而使该核酸结合于固相的处理。