[发明专利]一种牛乳中免疫球蛋白(IgG)含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分析检测乳中蛋白的方法，特别是一种检测牛乳中免疫球蛋白(IgG)含量的方法。属于检测技术领域。

背景技术

牛乳是日常生活中不可或缺的营养品，它含有丰富的营养物质，如酪蛋白、乳清蛋白、补体、脂肪和免疫球蛋白等。牛乳中含有的免疫球蛋白主要为IgG，IgA和IgM。其中，IgG含量最高，约为免疫球蛋白总量的80％。母牛分娩后第一天内分泌的初乳中免疫球蛋白含量最高，研究表明，其IgG的平均浓度可达59～80mg/ml。然而，第5-7天的初乳中IgG浓度已接近常乳水平，约为0.7～1.0mg/ml。免疫球蛋白具有多种生物活性功能，主要是识别和抵抗入侵的细菌和病毒等病原体，在增强机体的免疫能力、防止细菌和病毒入侵、活化补体、中和毒素、杀死肿瘤细胞等方面发挥着重要作用。

目前，国内尚未有乳免疫球蛋白(IgG)含量检测方法的国家标准和行业标准。检测乳免疫球蛋白(IgG)的方法有血清中和实验、免疫荧光抗体实验、琼脂扩散实验、补体结合实验、电镜观察、ELISA、PCR等方法。由于考虑到人力、物力和效率，国内科研院所常用乳免疫球蛋白(IgG)的检测方法是ELISA。ELISA法灵敏度高，最小检测限低，适合于乳免疫球蛋白(IgG)的检测，但是其检测时间较长，不适于适用于实际应用当中。鉴于该方法的优缺点，本专利发明了将使用毛细管电泳仪快速检测乳免疫球蛋白(IgG)含量的方法。毛细管电泳仪是一类包括电泳、色谱及其交叉内容的液相微分离技术。它能快速精确检测出牛奶中的掺假成分、抗生素、添加的功能性因子、乳清蛋白、免疫球蛋白、酶、糖、添加剂和其他小分子的含量。该方法操作简便、准确，检测到出结果时间仅为1h左右。

目前，毛细管电泳仪的应用前景非常广泛。许多国际官方权威机构，如FDA、U.S.P、CBER、CDER等均已认可毛细管电泳方法。权威机构欧洲药典中认可勒沃卡-贝斯庭盐酸盐中杂质的CE测定；欧洲药典中还认可促红细胞生成素(EPO)的毛细管电泳仪测定等。毛细管电泳仪已成为化学、农业、医学、生物工程、药学等众多领域的一个常规科研工具。

目前，国内毛细管电泳仪检测技术逐渐应用到乳品领域里，如产品开发和控制质量问题等领域中。但毛细管电泳技术尚未开发检测乳免疫球蛋白(IgG)的方法。本发明成功弥补了乳品领域中的缺点，能准确测定乳免疫球蛋白(IgG)的含量，从而有利于产品开发和质量控制当中。

发明内容

本发明的目的：一种牛乳中乳免疫球蛋白(IgG)含量的检测方法。

本发明的一种检测乳免疫球蛋白(IgG)含量的检测方法，其中，包括如下步骤：1)将乳免疫球蛋白(IgG)溶于样品缓冲液，制备得到多个不同含量乳免疫球蛋白(IgG)的标准溶液，并对多个溶液分别检测后得到乳免疫球蛋白(IgG)含量与检测结果之间的标准曲线；2)对样品进行检测，并得到检测结果；3)将所述的检测结果与所述的标准曲线比对，得到样品中乳免疫球蛋白(IgG)的含量；其中，检测样品的设备是高压毛细管电泳分析仪。

上述步骤1)中标准曲线的制定的方法优选如下：配制乳免疫球蛋白(IgG)标准溶液，在样品缓冲液中溶解乳免疫球蛋白(IgG)标准物质配制成分别为1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml，制备得到标准溶液，摇匀后使用高压毛细管电泳分析，得到检测结果，即得到乳免疫球蛋白(IgG)含量与平均校正因子的关系曲线；其中，所述的检测结果按照如下方法计算：按峰面积计算出平均校正因子。

上述的标准溶液或待检测样品的处理方法为：把标准溶液或待检测样品装入离心管中，在2000-6000r/min离心条件下离心5-15min，将样品与缓冲液按照1∶4-20的比例加入冻存管(或其他容器)，并摇匀，精确提取10-200ul处理样品加入样品管中，放置于超声波清洗机1～10min，使用毛细管电泳仪测定。

上述的样品缓冲液为：能够使蛋白质分散的缓冲液，优选如下缓冲液：

160m mol/L三甲基氨基甲烷缓冲液中加40m mol/L 3-吗啉代丙烷磺酸，60mmol/L乙二胺四乙酸二钠，7mol/L尿素，处理样品时添加5ul/ml的β-巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素0.05％，pH值为8.5

上述的摇匀步骤采用漩涡混合器。