[发明专利]参与螺旋霉素生物合成的多肽、编码这些多肽的核苷酸序列及其应用

权利要求书

1.编码参与螺旋霉素生物合成的多肽的多核苷酸，其中所述多核苷酸 的序列为：

(a)选自SEQ ID No.111和141的序列之一，

(b)由于遗传密码的简并性而衍生自序列(a)的序列之一。

2.多核苷酸，其编码与权利要求1所述的多核苷酸所编码的多肽相比， 具有一个或多个氨基酸残基的保守替代的多肽。

3.如权利要求2所述的多核苷酸，其分离自链霉菌属(Streptomyces) 的细菌。

4.如权利要求2所述的多核苷酸，其编码参与螺旋霉素生物合成的蛋 白质。

5.由权利要求1、2、3或4所述多核苷酸的表达而产生的多肽。

6.参与螺旋霉素生物合成的多肽，其中所述多肽的序列为选自SEQ ID  No.112和142的序列之一。

7.重组DNA，其包含至少一条如权利要求1、2、3或4中任一项所述 的多核苷酸。

8.如权利要求7所述的重组DNA，其中所述重组DNA包括于载体内。

9.如权利要求8所述的重组DNA，其中所述载体选自噬菌体、质粒、 噬菌粒、整合型载体、fosmids、粘粒、穿梭载体、BAC和PAC。

10.表达载体，其包含至少一种编码如权利要求5或6中所述多肽的核 酸序列。

11.表达系统，其包含权利要求10的表达载体和宿主细胞。

12.如权利要求11中所述的表达系统，其选自原核表达系统和真核表 达系统。

13.如权利要求12所述的表达系统，其选自在细菌大肠杆菌中表达的 系统、允许在昆虫细胞中表达的杆状病毒表达系统、允许在酵母细胞中表 达的表达系统和允许在哺乳动物细胞中表达的表达系统。

14.宿主细胞，其中已经导入了至少一种如权利要求1、2、3和4中任 意一项所述的多核苷酸和/或至少一种权利要求7、8和9中任意一项所述 的重组DNA和/或至少一种权利要求10所述的表达载体。

15.产生如权利要求5或6所述多肽的方法，其中所述方法包括以下步 骤：

a)将至少一种编码所述多肽的核酸插入适当的载体；

b)在适当的培养基中，培养预先用步骤a)的载体转化或转染的宿主细 胞；

c)回收条件培养基或细胞提取物；

d)从步骤c)获得的所述培养基或细胞提取物分离并纯化所述多肽；

e)根据需要，表征所产生的重组多肽。

16.如权利要求1、2、3和4中任意一项所述的多核苷酸的用途，用 于提高微生物的螺旋霉素产量，其中所述微生物为链霉菌属细菌。

17.产螺旋霉素的突变微生物，其过量表达至少一个包含如权利要求1、 2、3和4中任意一项所述多核苷酸的基因，其中所述微生物为链霉菌属细 菌，其中所述基因的过量表达是通过增加该基因的拷贝数和/或通过导入比 野生型启动子活性更高的启动子、和/或通过用如权利要求7、8或9中所 述的重组DNA转化产螺旋霉素微生物而获得的。

18.如权利要求17中所述的突变微生物，其中所述基因的过量表达是 通过增加该基因的拷贝数和/或通过导入比野生型启动子活性更高的启动 子而获得的。

19.如权利要求17或18中所述的突变微生物，其中所述基因的过量表 达是通过用如权利要求7、8或9中所述的重组DNA转化产螺旋霉素微生 物而获得的。