[发明专利]一种酶法快速测定食品中硝酸盐的试纸条

说明书

技术领域

本发明属于检测技术领域，涉及检测硝酸盐含量的技术，尤其涉及利用硝酸盐还原酶将硝酸盐还原生成亚硝酸盐而快速测定食品中硝酸盐的试纸条及其应用。

背景技术

目前，检测食品(包括食用农产品，下同)中硝酸盐含量意义十分重要。硝酸盐本身没有危害但被人体摄入后可在硝酸还原细菌的作用下转化成亚硝酸盐，亚硝酸盐可使血红蛋白丧失携氧能力，引起中毒；另外亚硝酸盐在一定情况下可形成据有致癌作用的亚硝胺类化合物。现在食品的安全质量问题在国内市场和出口贸易中日益受到重视。因此研究快速检测食品中硝酸盐的方法对于无公害和绿色食品生产、贸易和市场监测具有重要意义。

在硝酸盐检测的若干种方法中，Griess检测是最流行，最简单的方法之一。Griess检测的原理为亚硝酸根离子与对氨基苯磺酸在酸性条件下发生重氮反应，然后再与二盐酸-1-萘乙二胺发生偶联反应，生成一种紫红色的偶氮化合物，其颜色深浅与亚硝酸盐含量成正比，再根据亚硝酸盐和硝酸盐之间的转化比例确定不同浓度的硝酸盐所对应的颜色。但硝酸盐检测时必须先把硝酸盐先转化为亚硝酸盐。目前，在国家标准(GB/T5009.33-2003)中用于检测硝酸盐的方法为镉柱还原法，但此法必须在实验室中操作，并且操作冗长；镉可以挥发，对人体具有很大的毒性。经检索文献专利可知，谢增鸿等人发明的“蔬菜中亚硝酸盐、硝酸盐的快速检测试纸及其检测方法”(申请号：03116663.6；公开号：CN1445531A)，吴良欢等人发明的“硝酸盐、亚硝酸盐快速测定试纸及其应用”(申请号：200510048918.4；公开号：CN 1645114A)均采用锌粒或锌粉或其它金属还原法，此方法中，样品需要一定的前处理，专一性不太强，灵敏度不太高。采用生物化学方法将硝酸盐还原生成亚硝酸盐并应用于硝酸盐含量的检测报道很少。

发明内容

本发明的目的是克服上述现有技术的不足，提供硝酸盐含量检测过程中更方便、专一性更强，灵敏度更高的还原方法，以更有助于硝酸盐含量的检测。

本发明提供的硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法为生物化学方法，由硝酸盐还原酶+NAD(P)H系统催化硝酸盐还原生成亚硝酸盐。本发明提供的硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法在快速测定食品中硝酸盐含量的场合应用，特别是应用于本发明设计的试纸条中。本发明提供的方法使用方便、专一性强、能够实现食品中硝酸盐含量的快速测定。

本发明提供的是一种利用硝酸盐还原酶快速测定食品中硝酸盐的试纸条及其应用，具体是：

1.本发明涉及的试纸条中硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法是生物化学方法，由硝酸盐还原酶+NAD(P)H系统催化硝酸盐还原生成亚硝酸盐。其中硝酸盐还原酶指NADH依赖型硝酸盐还原酶(E.C.1.7.7.1)或NADPH依赖型硝酸盐还原酶(E.C.1.7.7.2)。

2.本发明涉及的硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法在快速测定食品中硝酸盐含量的场合应用，特别是应用于本发明设计的试纸条中。

3.本发明涉及的快速测定食品中硝酸盐的试纸条，由显色区和还原区组合构成，显色区为浸有等体积N-1-萘基乙二胺二盐酸和对氨基苯磺酸、酒石酸的混合液，还原区含有发明内容1所述的硝酸盐还原酶。具体通过以下方法制备：

(1)还原区的制备：将定量滤纸剪成0.6cm×10.0cm的长纸条，浸泡于7000.0μmol·L^-1硝酸盐还原酶、10.0mmol·L^-1NAD(P)H的0.1mol·L^-1磷酸盐缓冲液(pH7.5)15min后，于35℃干燥或用冷风吹干，将该试纸片切割成规格为0.6cm×0.8cm的试纸片；

(2)显色区的制备：将定量滤纸剪成0.6cm×10.0cm的长纸条，浸泡于4.5％N-1-萘基乙二胺二盐酸的蒸馏水溶液15min后，于35℃干燥或用冷风吹干；后于7.5％对氨基苯磺酸、15.0％酒石酸的等体积混合蒸馏水溶液中浸泡15min，再于35℃干燥或用冷风吹干；将该试纸片切割成规格为0.6cm×0.8cm的试纸片；

(3)试纸条的制备：将一显色区试纸片粘接在准备好的6.0cm×0.6cm长形硬滤纸条的一端，将一还原区试纸片间隔0.3cm粘接在同一长形硬滤纸条的显色区试纸片的上端。将制作好的试纸条在避光、干燥、低温(2～8℃)下保存，即制成硝酸盐试纸条。注意试纸条免于污染。