[发明专利]可用来抵御并治疗HIV感染的去免疫化单克隆抗体

说明书

本申请是基于以下中国专利申请的分案申请：

原案申请日：2003年11月10日

原案申请号：2003801087712(PCT/US2003/035758)

原案申请名称：可用来抵御并治疗HIV感染的去免疫化单克隆抗体

技术领域

本发明涉及去免疫化抗体，是作为治疗人类获得性免疫缺陷病毒(HIV)和CD4-引起 的自身免疫紊乱的有效免疫治疗药物。

背景技术

从发现HIV是机体获得性免疫功能缺乏综合症(AIDS)的致病源到现在已有20年， 从克隆AIDS病毒并着手揭示它的各种特性开始，到现在已经有18年，尽管在这期间为了 研制出有效的疫苗而进行了大量的科学研究，但是HIV的免疫治疗仍然存在着许多困难。 这些困难主要包括：1型HIV病毒(主要的HIV病毒类型)的高变异性，HIV病毒传播 途径和方式的多样化以及缺少针对HIV病毒的免疫应答的了解。

摩尔等人的综述[1]报导，针对各种抗原决定簇的抗体只对自身同源病毒具有抑制活 性，并分离密切相关的包膜蛋白。此外，识别包膜蛋白的保守区域越多的单克隆抗体，其 潜在的免疫治疗靶向性越好，它们绝大多数不会很强地抑制多种主要的分离物。如何获得 大量抗病毒抗体显得如此高深莫测，以至于针对HIV的疫苗学领域主要集中于一些可以提 供针对该疾病的方法，最好提供一种希望[2]。

原代HIV-1分离物是从限制性培养的患者外周血液单核细胞(PBMCs)或者含有未被 感染的PBMCs患者血浆中获得的。它们非常类似于可以感染人的HIV野生病毒株[3]。原 代分离物很容易和一般实验室常用的T-热带病毒区分开来，例如IIIb/LAI，SF2和MN， 这些病毒已经得到繁殖，非常适合在人的T淋巴细胞系中生长。

首先，大多数的HIV-1的原代分离物属于M热带病毒。它们在培养的T细胞系中不 易生长，但是它们是单核细胞或者巨噬细胞，能够感染原代T细胞[4]。其次，原代分离物 可以有效抵制各种可溶形式的受体蛋白CD4(rsCD4)重组造成的体外中和作用，而且， 相对于中和作用而言，它需要的rsCD4的量要比实验室使用的品系多200到2700倍[5]。 第三，原代分离物也可以抵制由gp120疫苗引起的抗体中和反应[6]。

原代分离物包括在PBMC培养下的多核体诱导的分离物(SI)和非多核体诱导(NSI) 的分离物。大多数SI原代分离物可以在HIV高敏性的MT2 T细胞系中复制，但是很少能 够在转化率不高的T细胞系中复制，比如通常用来培养实验室适用分离物的CEM或H9 细胞系。非多核细胞诱导(NSI)的原代分离物只能在来自外周血液的原代T细胞中培养。

早期错误的观点乐观地认为抗体可以对重组HIV-1包裹亚基疫苗产生有效的应答(比 如gp120和gp160疫苗产物)，利用包裹依赖性疫苗对接种者血清进行临床实验，发现他 们的血清能够在体外中和实验室HIV-1分离物[7，8]。当时，实验室适用的分离物和原代 分离物之间的本质差异并不是很清楚，当发现接种者血清中的抗体大多无法有效地抑制 HIV-1原始患者病毒分离物后，这种乐观的观点开始动摇[6，9]。

早期的疫苗诱导有效抗体的乐观看法错误地来源于对猿类免疫缺乏病毒(SIV)灭活 病毒预备物的研究。由于HIV-1和SIV两者在形态、遗传结构、感染及病变过程上的相似， 感染SIV的恒河猴似乎可以被用作开发不同AIDS疫苗和抗HIV抗体的出色的模型。对于 SIV模型的早期研究表明，在人T细胞上生长并且在辅助因子帮助下表达的SIV病毒的非 活性预备物，能够使得接种各种高感染致病剂量的人细胞成熟SIV病毒的短尾猿免于感染 [10]，出乎意料的是，将这种从同类猴细胞中培养出来的SIV病毒储液再次感染已经被免 疫过的动物时，这种保护竟然消失了。

稍后利用猴细胞成熟的SIV病毒和未感染的人细胞进行的研究表明，对于防止SIV感 染的早期研究发现，可能是由于激发了对于异基因宿主细胞蛋白的免疫应答，而不是产生 了对于病毒编码产生抗原的应答[11]。SIV被动免疫试验表明，一些针对细胞的抗体有可 能引起在缺少细胞介导免疫的情况下对于SIV感染的保护作用[12]。