[发明专利]胱抑素C测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学免疫体外诊断领域，涉及一种免疫比浊检测试剂， 进一步地，本发明涉及一种胶乳颗粒增强型胱抑素C检测试剂盒。

背景技术

胱抑素C(CystatinC)是一种低分子量蛋白质，可由机体所有有 核细胞产生，产生率恒定。循环中的胱抑素C仅经肾小球滤过而被清 除，是一种反映肾小球滤过率变化的理想的内源性标志物，而肾小球 的滤过率(glomerular filtration rate，GFR)是监测肾功能的一个重要 指标，尤其对于肾移植的病人，快速准确的掌握肾小球滤过率的变化 是十分重要的。此外由于胱抑素C分子量大于肌酐，且带正电荷，所 以它更容易反映肾小球滤过膜通透性的早期变化，可以在肾小球滤过 率轻微降低时升高，较肌酐更敏感，作为肾功能试验优于血清肌酐，具 有重要的临床应用价值。

胱抑素C，是一种由120个氨基酸残基组成的分子量仅13KDa的 低分子量分泌性蛋白质，是半胱氨酸蛋白酶抑制物超家族的成员之。 胱抑素C基因5′侧翼序列与“看家基因”的启动子区具有相同的特性， 也属于“看家基因”即此基因在所有组织恒定持续地转录及表达，无组 织学特异性，广泛地存在于各种体液中，如脑脊液、血液、唾液、精 浆等，机体胱抑素C产生率相当恒定。而胱抑素C是一种低分子量蛋 白质，可经肾小球自由滤过，肾脏是清除循环中胱抑素C的唯一器官， 所以血清胱抑素C浓度主要由GFR决定，由此可见胱抑素C是一种理 想的反映GFR变化的内源性标志物。

临床研究低分子量蛋白质(β₂-微球蛋白、视黄醇结合蛋白、胱抑 素C)浓度与GFR(⁵¹Cr-EDTA清除率或其金标准^99mTc-DTPA清除率) 的相关性，血清胱抑素C、肌酐浓度诊断异常GFR的敏感性分别为 78.1％及57.1％，各自浓度倒数与GFR(⁵¹Cr-EDTA清除率)的相关系 数分别为：0.81、0.50。表明胱抑素C是低分子量蛋白质中与GFR最 相关的内源性标志物，甚至优于血清肌酐。血清β₂-微球蛋白浓度由于 在炎症、肿瘤及免疫疾病时也可升高，故不是理想的GFR内源性标志 物。而胱抑素C即使在炎症状态下，其产生率也不会改变，血清浓度 受年龄、性别、疾病的病情变化的影响较小。说明胱抑素C的诊断准 确性明显优于血清肌酐。

免疫浊度测定的基本原理是：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗 原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过量时，形 成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系 列的标准品对照，即可计算出待检测物的含量。但含量低的分子量小 的抗原抗体复合物极难形成浊度，除非放置较长时间；如形成较大的 复合物，则抗原和抗体用量也较大，显然不符合微量化的要求。于是 发展了免疫胶乳浊度测定法，是在胶乳凝集定性试验基础上发展建立 的-种非放射性均相免疫浊度测定法，其基本原理是：将抗体吸附在大 小适中、均匀一致的胶乳颗粒上，当遇到相应抗原时，则使胶乳颗粒 发生凝集。单个胶乳颗粒在入射光波之内不阻碍光线透过，两个或两 个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过光减少，这种减少的程度与胶乳颗粒 凝聚的程度呈正比，当然也与待测抗原量呈正比，由此可测出标本中 待测物的含量。

由于血清中胱抑素C浓度较低，故其测定方法需较高的分析灵敏 度及特异性。最早采用单向免疫扩散法(RID)及酶免疫测定法(EIA) 对胱抑素C含量进行测定，而这两种方法不仅费时，检测限也较差。 较简单且更灵敏的放射、荧光及各种酶免疫测定(RIA、FIA及EIA) 的方法能改善胱抑素C测定的可靠性，但测定时间仍较长，无法常规 应用，更无法用于急诊测定。以上各种测定方法均属非均相测定方法， 很难自动化，因此限制了胱抑素C的广泛临床应用。采用上述的胶乳 免疫均相测定方法，即在胶乳颗粒上包被抗体，与抗原结合时颗粒发 生凝集，此方法很容易自动化。Kabanda等于1994年报道的测定胱抑 素C的胶乳颗粒凝集法是一种颗粒计数免疫测定法。Kyhse andersen 等于同年报道了一种颗粒增强透射免疫比浊法(particle-enhanced turbidimetric immunoassay，PETIA)，使胱抑素C测定的时间缩短至 5min左右，且可在自动生化分析仪上进行，使胱抑素C测定的常规应 用成为可能。