[发明专利]一种血管内皮抑制素生物活性的检测方法

权利要求书

1、一种血管内皮抑制素生物活性的检测方法，包括如下步骤：

a、人脐静脉血管内皮细胞HUVEC传代培养至对数生长期，胰酶消化后均匀悬浮，向培养孔中接种相同体积的细胞悬液；

b、将血管内皮抑制素标准品和待测样品在步骤a所述的培养孔中分别进行相同浓度梯度的倍比稀释，培养孔中细胞悬液继续细胞培养；

c、微量酶反应比色法测定培养孔中的OD值；

d、将血管内皮抑制素标准品和待测样品的倍比稀释浓度分别与对应的OD值采用四参数origin拟合，分别得到血管内皮抑制素标准品和待测样品抑制型S-形曲线，所述四参数为最大光吸收值、最小光吸收值、半效量浓度和斜率；

e、按下式计算试验结果：

样品生物学活性(U/ml)＝Pr×Ds×Es/(Dr×Er)，其中，Pr为标准品生物学活性；Ds为样品稀释倍数；Dr为标准品稀释倍数；Es为样品相当于标准品半效量的稀释倍数；Er为标准品半效量的稀释倍数。

2、权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述培养具体为：在37℃，5％CO₂的培养箱中培养。

3、权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤a中所述人脐静脉血管内皮细胞HUVEC传代培养至对数生长期，具体为：人脐静脉血管内皮细胞HUVEC传代至第2-6代，并培养至对数生长期。

4、权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤b中所述培养孔中细胞悬液继续细胞培养，具体为培养孔中细胞悬液继续细胞培养3-5天。

5、权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤a中所述向培养孔中接种相同体积的细胞悬液，具体为：向培养孔中接种160-180μl细胞密度为750-5000个/ml的细胞悬液。

6、权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤b中所述相同浓度梯度的倍比稀释，具体为：按终浓度为1000、500、250、125、62.5、31.3、15.6、7.8μg/ml进行稀释。

7、权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤c中所述微量酶反应比色法测定培养孔中的OD值，具体为：采用MTT法或MTS法测定培养孔中的细胞OD值。

8、权利要求7所述的检测方法，其特征在于所述测定培养孔中的细胞OD值，具体为490nm或570nm波长测定培养孔中的细胞OD值。

9、权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述血管内皮抑制素标准品采用重组人血管内皮抑制素冻干制剂。

10、权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述生物活性为细胞增殖抑制活性。