[发明专利]防治蔬菜土传病害的AR156合剂

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种防治蔬菜土传病害的复合生防菌剂AR156合剂，属于农作物防病治病技术领域，专用于多种蔬菜土传病害的无公害防治。

二、技术背景

植物土传病害多为土壤习居菌，如引起茄科作物青枯病的Ralstonia solanacearium，引起多种植物枯、黄萎病的Fusarium oxysporium，Verticillium dahlaei，以及近年来在各地危害越来越严重的根结线虫病害(Meloidogyne spp.)等。茄科作物青枯病属世界性病害，病原细菌可侵染50多科200多种植物，全球范围内造成的经济损失多达120亿美元；辣椒疫病Phytophathora chili在我国蔬菜生产上常年造成巨大损失；根结线虫(Meloidogyne spp.)侵染保护地蔬菜，致使寄主常年减产15-25％，有时达70％以上，严重地制约了蔬菜的生产和出口创汇，有的甚至到了无法种植的地步。据估计，我国农作物的生产每年因土传病害而遭受的经济损失达数十亿元以上。而生产上，这些病害往往同时发生，如番茄大棚土壤中根结线虫和细菌性青枯、真菌性枯萎、黄萎同时发生复合侵染，造成的损失非常严重。

这些土传病害都有寄主范围广、抗逆性强、难以根除等特点，对复合侵染防治尤其困难。生产中往往既缺乏优良的抗病品种，又缺乏有效的化学防治药剂。而过多施用化学农药会带来一系列生态和社会问题，如病虫草产生的抗性，对非靶标生物的直接危害，对土壤、水、大气的污染，生物富集作用对人健康的影响，国际贸易对农药残留农产品的限制等。早在1992年世界环境与发展大会就要求“在全球范围内控制化学农药的销售和使用”，不能过份依赖化学农药已成为人类的共识。

研究与开发生防制剂，利用生防细菌和PGPR细菌是一种比较有效的防治手段，通过空间位点竞争和营养的竞争，直接分泌胞外酶降解作用，产生抗生素抑制病原，诱导植物产生抗病性等机制，既可以减少化学农药使用带来的环境污染，提高农产品的价值，又可以改善土壤微生态环境，压低有害生物的种群数量，利于农作物的可持续生产，为我国无公害绿色蔬菜的生产提供有力保障。现有技术中按照本实验室的菌体保藏液专利(公开专利号CN1358838，公开日：2002年7月17日)方法，菌体可室温保存2～3年。

三、发明内容

技术问题：

本发明的目的是针对当前防治植物土传病害使用的化学农药污染严重、使用成本过高的缺陷，并且现有技术中的对多种植物土传病害没有同时具有较高防效的生防制剂，开发一种防治多种蔬菜土传病害的复合生防菌剂，该菌剂的防效可达45％以上，并且有显著的促生作用。

技术方案

本发明为一种防治多种蔬菜土传病害的复合生防菌剂AR156合剂，含三种细菌成分：分别是菌株AR156，为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)于2007年01月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.1929；菌株XY21为沙雷氏菌属(Serratia sp.)，于2007年05月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.2059；菌株SM21属芽孢杆菌属(Bacillus sp.)，于2007年05月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.2058。

复合生防菌剂AR156合剂的制备方法为：

1)将以上所述的三种菌株接种到PDA培养液中分别培养37℃180rpm，16～20小时后在超净工作台中分别取样测600nm处的OD值，测定过程中以未接菌的培养液来调零；

2)当培养至OD值在0.5～0.8之间时，将种子菌液以1∶100体积比加入PDA培养液中，30℃180rpm振荡培养20～24小时，然后4000g离心10min，每1000ml培养液获得13～16g湿菌，每克湿菌含4×10¹⁰～10¹⁵个菌体；

3)取湿菌与菌体保藏液(公开专利号CN1358838，公开日：2002年7月17日)按1g∶40ml配成三种细菌单剂，再将三种细菌单剂按1∶1∶1混合均匀，即得复合生防菌剂，成品中活菌总浓度为1×10⁹～1×10¹²cfu/ml，用于防治蔬菜土传病害。