[发明专利]HIV肽，抗原，疫苗组合物，检测HIV所诱导的抗体的免疫测定试剂盒及方法

说明书

本申请是申请日为2000年3月2日、申请号为00805735.4、发明 名称为“HIV肽，抗原，疫苗组合物，检测HIV所诱导的抗体的免疫测 定试剂盒及方法”的发明专利申请的分案申请。

本发明涉及基于HIV gag p24保守区域的新肽、游离形式或载体结合 形式的包含至少一种上述肽的抗原、包含至少一种该抗原的疫苗组合物、 使用此抗原检测由人类免疫缺陷病毒(HIV)或HIV特异性肽诱导的抗体 的免疫测定试剂盒和方法。

背景

HIV感染的全球性流行急需得到控制，而开发抗HIV的疫苗是AIDS研 究中的一个主要目标。通常，疫苗应当激活抗原呈递细胞，克服T-细胞 应答中的遗传限制并产生T-与B-记忆细胞。该病毒群体的可变性给获 得有效的HIV疫苗造成更大的困难。目前还没有在试图开发HIV疫苗的 过程中取得突破性进展的报导。现在普遍接受的是，诱导抗原特异性体 液和细胞介导的免疫是开发有效的预防性和治疗性疫苗的关键。免疫系 统的所有三种武器包括中和抗体、CD8+CTL和T辅助细胞1(TH1)细胞 是对抗HIV的保护性免疫所必需的。已知CTL能够清除其它病毒的感染 (Ada，免疫细胞生物学(Immunol.Cell Biol.)，72：447-454，1994)， 并且CTL能够在病毒后代能够产生并通过细胞裂解释放之前于感染早期 裂解受感染的靶标(Ada等，同前)。焦点集中在抗原的选择及不同佐剂 的设计和评价上。在不同的体内和体外研究中使用的抗原均来自主要源 于gp160及在某种程度上源于p24的粗蛋白和各种合成肽。对gp120的 V3环已进行了大量的研究。观察到T和B细胞应答的诱导，然而，一项 体外研究报导，源于gp41保守区的肽显示了对感染的增强(Bell S.J. 等，临床实验免疫学(Clin.Exp.Immunol.)，87(1)：37-45，(1992 年1月)。

侯选疫苗中天然存在的HIV病毒序列由于该病毒所固有的通过改变存 在于感染细胞表面的表位外观特征而隐藏的能力而不能刺激稳定的免疫 应答。免疫系统误认为与一种特定的氨基酸序列相关而实际上重要的氨 基酸却被隐藏起来。

最近的一项关于抗gag p24蛋白抗体效价的研究显示，慢AIDS发展 进程与高效价相关，而快AIDS发展进程与低效价相关。已经显示具有低 p24抗体效价的人比具有高p24抗体效价的人其AIDS的发展快得多 (Zwart G.等，病毒学(Virology)，201，第285-93页，1994年6月)， 这表明p24能够在控制AIDS的发展中起着关键的作用。

在WO91/13360中描述了新的HIV p24肽，其中在一种鉴别所诊断的HIV 阳性血清样品真假的方法中使用了该肽。

Johnson R.P.等(免疫学杂志(The Journal of Immunology)，第147 卷，第1512-1521页，No.5，1991年9月1日)描述了在三个HIV-1血 清反应阳性个体中对gag特异性CTL应答的良好特异性进行的分析，发 现该gag特异性CTL应答是由I型HLA限制的CD3+CD8淋巴细胞介导的。

EP-A-0 356 007公开了抗原决定簇，具体地它涉及到与HIV-1中存在 的蛋白质相关并且能够作为潜在的抗AIDS疫苗的基础使用的合成多肽序 列。

Rosenberg E.S.等，科学(Science)，第278卷，1997年11月21 日，第1447-1450页描述了，病毒特异性CD4+T辅助淋巴细胞是在许多 慢性病毒的感染中维持有效免疫的关键，但具有特征性的是在1型慢性 人类免疫缺陷病毒(HIV-1)的感染中不能检测到该细胞。相反地，相应于 p24的HIV-1特异性增殖应答与病毒的携带有关。他们推断HIV-1特异性 辅助细胞在免疫治疗干涉及疫苗开发中可能是重要的。

F.Hoffmann-La Roche & Co.Aktiengesellschaft的EP 0 230 222、 EP 0 270 114、DE 37 11 016和GB 2 188 639涉及到HTLVIII Gag/Env 基因的蛋白或融合蛋白的重组表达和纯化。可以将这些由天然序列组成 的蛋白质纯化至均一并作为用于检测抗AIDS相关病毒的抗体的诊断测试 的基础。也可以对该gag/env蛋白进行配制，以用作通过预防免疫防止 AIDS的疫苗。