[发明专利]猪瘟重组腺病毒及其在制备猪瘟基因工程疫苗中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及重组病毒，尤其涉及一株猪瘟重组腺病毒，本方面还涉及该重组腺病毒在制备猪瘟基因工程疫苗中的用途，属于生物技术领域。

背景技术

猪瘟(classical swine fever，CSF)是由猪瘟病毒(classical swinefever virus，CSFV)引起的一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。该病死亡率高达80-90％，世界动物卫生组织(OIE)将其列入OIE疾病名录，我国也将其列为一类传染病。CSFV为有囊膜的正链RNA病毒(Moennig V.Introduction toclassical swine fever virus，disease and control policy.Vet Microbiol，2000，73(2-3)：93-102.)，其基因组大小约为12.3kb，含有一个大的开放阅读框架(ORF)，编码一个由3898个氨基酸残基组成的多聚蛋白，此多聚蛋白经病毒和宿主细胞酶的作用，形成4个成熟的结构蛋白(C、E^rns、E1和E2)以及至少7个非结构蛋白。E^rns和E2糖蛋白是CSFV的主要保护性抗原，均能独自诱导机体产生中和性抗体，保护机体免受强毒的攻击(Meyers G，Tautz N，Stark R，et al.Rearrangement of viral sequences in cytopathogenic pestiviruses.Virology，1992，91(1)：368-386.)。E2蛋白由ORF编码的⁶⁹⁰Arg至¹⁰⁶⁰Leu之间的370个氨基酸残基组成，位于病毒囊膜表面，参与病毒的感染过程。在猪瘟病毒编码的蛋白中，E2是最不保守的一种蛋白，但又是猪瘟病毒的主要保护性抗原，能诱导机体产生中和抗体，成为近年来研制新型疫苗和血清学诊断抗原的主要靶蛋白。

随着分子生物学技术的迅速发展，特别是重组DNA技术的建立，使得各种病毒用作载体成为可能。目前比较成熟的病毒载体主要有逆转录病毒、腺病毒及痘苗病毒等载体。其中，腺病毒载体以其安全、高效、宿主范围广、转移和表达外源基因能力强的特点，成为继逆转录病毒载体后在基因治疗、基因免疫等方面应用较广的一种基因载体(Adam E，Nasz I.Significance of recombinantadenovirus in experimental gene therapy.Orv Hetil，1995，136(15)：755-761.)，尤其是复制缺陷型人血清5型腺病毒载体，近年来在重组病毒活载体疫苗的构建上得到了广泛的应用，这种载体到目前为止已经发展到了第三代，由于缺失了病毒非必要基因区(E1/E3)，使得能够携带大片段的外源基因，而且只能够在特定的细胞系中繁殖。另外，该载体系统还引入了CMV启动子，使得外源基因可以高水平的表达(A，Adam M，Monteil M，et al.Efficacy ofreplication-defective adenovirus-vectored vaccines：protection followingintramuscular injection is linked to promoter efficiency in muscle representativecells.Virology，1997，238(2)327-335.)。

近年来，E1和E3区缺失的腺病毒载体越来越得到研究者的青睐，因为这种载体有诸多优势：易于制备，操作方便，可携带较大的外源片段，可感染的宿主细胞多，导入效率高，理化性质稳定，易于分离纯化，不整合到宿主细胞的基因组(Randrianarison-Jewtoukoff V，Perricaudet M.Recombinant adenovirusesas vaccines.Biologicals，1995，23(2)：145-157.)。另外，重组腺病毒可同时表达多个基因，而且还可以对表达产物进行正确的翻译后修饰，应用这种腺病毒载体构建的活载体疫苗在诱导体液免疫上较DNA疫苗及灭活疫苗效果好，而且在动物体内不存在人腺病毒抗体，不用考虑母源抗体的干扰问题(Bangari DS，MittalSK.Development of nonhuman adenoviruses as vaccine vectors.Vaccine，2006，24(7)：849-862.)。