[发明专利]引起食物中毒沙门氏菌属快检试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种引起食物中毒沙门氏菌属快检试剂，特别是最常见的在外环境中生活力较强，在水、牛乳及肉类食品中能生存几个月，最适温度下繁殖迅速的鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、付伤寒甲、乙沙门氏菌的快检试剂。沙门氏菌食物中毒多由动物性食品，特别是肉类引起(如病死牲畜肉、熟肉制品)，也可由家禽、蛋类、奶类食品引起。以急性胃肠炎为主，主要症状有呕吐，腹泻，腹痛，粪便为黄绿色水样便。发热38℃-40℃。重病人出现寒战，惊厥，抽搐和昏迷。老人，儿童和体弱者如不及时进行急救处理也可导致死亡。传统常规检测诊断方法为细菌培养分离，选择标准典型菌株再进行血清学鉴定检测。整个检测确诊过程耗时长、一般需要72-120小时，灵敏度不高，对快速准确诊断，抢救病人带来极大的不便，本发明打破传统常规分步检测手段，在快速鉴别诊断食物中毒致病菌沙门氏菌属的应用上具有明显的优势。从而减少由于检测手段落后而造成对人体健康的危害，具有快速、准确、灵敏度高等特点。较传统方法更具有应用价值，对指导临床诊断和治疗，防止滥用抗菌药物具有重要意义。

背景技术

本发明的目的在于提供一种引起食物中毒沙门氏菌属快检试剂，引起食物中毒沙门氏菌属，常见的有鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、付伤寒甲、乙型沙门氏菌、都柏林沙门氏菌。全年都可发生，多由动物性食品如肉类引起，也可由鱼、蛋、奶及家禽引起。其致病原因是用病死畜、禽的肉制成的食品；病死畜、禽的粪便污染了食物；带菌者在食品加工过程中污染了食品。传统常规检测诊断方法是要经过标本采集、分离鉴定、小白鼠喂饲实验、双份血清凝集实验、沉淀实验等鉴定实验才能确诊。传统生化鉴定试验周期长，操作繁琐，试剂质量无法保证，严重影响了致病菌确认工作、选择性分离培养的培养基上挑选可疑菌落需要经验，存在漏检的可能，而沙门氏菌属的肠毒素稳定性很高，加工后的食物虽然有时检不出，但仍有可能存在肠毒素，而肠毒素的常规检验方法需要做动物实验，难度大，周期长。整个检测确诊过程耗时长约4-15天。本发明是将增菌液中增加了特异性的沙门氏菌属多价及单价血清，使检测确诊过程缩短至2-6小时，增菌时能够利用特异血清的血清凝集反应，鉴定的准确率均在97％以上。检测致病菌时耗时少、灵敏度高，准确性强。

发明内容

本发明的要点在于选择合适的培养基组分，并进行合理混配，经加温、溶解、混合、冷却、分装、高温灭菌、无菌制备血清等工艺而成一种引起食物中毒沙门氏菌属快检试剂。

本发明选择的快检试剂配方如下(克/每升蒸馏水)蛋白胨5.0-10.0；乳糖3.5-4.5；磷酸氢二钠4.0-5.0；磷酸二氢钠5.0-6.0；复合生长因子10.0-20.0；亚硒酸氢钠3.5-4.5；无菌沙门氏菌属多价及单价血清10-20ml；蒸馏水加至1000mL，调pH7.1

快检试剂呈无色或淡黄色透明液体，无任何沉淀物。将质控菌做生长的灵敏度试验，伤寒沙门菌达10-3(稀释度)，鼠伤寒、副伤寒沙门菌达10-7；食物源性中毒样品在接种培养2-6小时时，液面交界有处有白色沉淀凝集，镜下有凝集包团，为阳性，即可确诊。亚硒酸盐有生殖毒性，使用时应特别注意。亚硒酸盐对革兰氏阳性菌有较强的抑制作用，而对沙门菌则无明显的抑制性，在磷酸盐缓冲作用下，这种差异更显著。也可用亚硒酸钠，但不及亚硒酸氢钠效果好。大肠埃希菌等细菌能使乳糖发酵产酸，它中和因亚硒酸盐被细菌还原而产生的碱。磷酸盐为缓冲剂，保持培养基pH稳定，有利肠道致病菌的生长繁殖。两者的用量比例可根据蛋白胨的酸碱度及缓冲容量调整，总量为10g/L。.此培养基中的蛋白胨品种很重要，因此无论国产或国外蛋白胨在使用前必须先作细菌学检测。用于分离伤寒沙门菌及乙型副伤寒沙门菌效果更好。配好的培养基超过90℃数分钟既有红色沉淀物形成，应贮于2~8℃度冰箱，保存2周。如时间超过二周或贮于室温，特别是夏季，易出现棕色或红色沉淀，增菌效果减退。粪便标本接种量约占培养基体积的1/10，或将含有粪便的棉拭子插入培养基中，尿液标本可等量加入双倍浓度增菌液中。增菌时间应根据标本污染情况而定，污染严重的在2h以内，反之可适当延长增菌时间，但不得超过12h，即行转种于选择性分离培养基，因延长增菌时间可使大肠菌群迅速生长繁殖，影响沙门菌凝集包团检出。

本发明产品的制备方法是：

1)、先将亚硒酸氢钠加入100mL无菌蒸馏水中，充分振荡溶解；

2)、将蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、复合生长因子混合于900mL蒸馏水加热溶解，调pH7.1，121℃15min高压灭菌；