[发明专利]大肠埃希氏菌0157引起食物中毒快检试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种大肠埃希氏菌0157引起食物中毒快检试剂。特别是最常见的在外环境中生活力较强，在44℃下可以生长，十分耐热、耐干燥、耐酸环境(pH2.5)，有时还可以抵抗辐射和抗生素，在水、牛乳及肉类食品中能生存几个月，更糟糕的是很低剂量的大肠埃希氏菌0157:H7就可以致病，最适温度下繁殖迅速的大肠埃希氏菌0157的快检试剂。正常的消化道内有大量细菌竞争生存空间和营养。在这个环境里通常需要有上千个沙门氏菌才会致病，而大肠埃希氏菌0157:H7的最低感染剂量是少于50个，对细菌来讲极小的数量。大肠埃希氏菌0157食物中毒多由动物性食品，特别是肉类引起(如病死牲畜肉、熟肉制品)，也可由家禽、蛋类、奶类食品引起。以急性胃肠炎为主，主要症状有呕吐，腹泻，腹痛，粪便为黄绿色水样便。发热38℃-40℃。重病人出现寒战，惊厥，抽搐和昏迷。老人，儿童和体弱者如不及时进行急救处理也可导致死亡。传统常规检测诊断方法要经过细菌分离培养及生化鉴定、血清学试验、肠毒素试验才能确诊。整个检测过程耗时长、一般需要5-6天，灵敏度不高，对快速准确诊断，抢救病人带来极大的不便，本发明打破传统常规分步检测手段，在快速鉴别诊断食物中毒致病菌大肠埃希氏菌0157的应用上具有明显的优势。从而减少由于检测手段落后而造成对人体健康的危害，具有快速、准确、灵敏度高等特点。较传统方法更具有应用价值，对指导临床诊断和治疗，防止滥用抗菌药物具有重要意义。

背景技术

本发明的目的在于提供一种引起食物中毒大肠埃希氏菌0157快检试剂，大肠埃希氏菌，它是人畜肠道中的常见菌，不仅无害，还能合成维生素B、维生素K及叶酸供给人畜，它产生的大肠埃希氏菌素可抑制某些病原微生物在肠道内繁殖。同时它能够抑制正常发酵，并和乳酸菌共生，对食物的消化、吸收和各种机能的调节有促进作用，一般不致病。但有少数大肠埃希氏菌可引起人体局部炎症、婴儿腹泻和食物中毒，为致病性大肠埃希氏菌。大肠埃希氏菌为革兰氏阴性(Gram’s negative)短小杆菌，它能在普通营养琼脂上生长，能分解乳糖和葡萄糖，产酸和气体，最适生长温度为37℃，最适pH7.4~7.6，皆可生长，繁殖速度快，在适宜条件下其世代时间仅17~19min。致病性与非致病性大肠埃希氏菌，不能从形态、生理、生化等性状区分，只能用血清学方法，从抗原性质不同加以区分。致病性大肠埃希氏菌的种类有数百个，引起的症状也不相同，肠致病性大肠埃希氏菌能产生一种与痢疾志贺菌相似的毒素如肠出血性大肠埃希氏菌0157:H7。其毒力最强，造成肠出血，约有10％可发展成肾出血。主要症状是突发性腹痛，并危及肝、肾。在小儿中常导致溶血性尿毒综合症，威胁生命。牛是大肠埃希氏菌0157的宿主，而由带菌牛产出的牛肉或牛乳中都可含有病菌。这种病菌污染是通过牛粪所致。当土壤、水源受粪便污染时可带有此菌，曾发生过由于水污染致病性大肠埃希氏菌而引起食物中毒。该菌所引起的食物中毒大多发生于夏季，以熟肉和凉拌食品为多见，污染源是人和动物大便，经手、苍蝇和不洁用具等而污染食品，在适宜细菌大量繁殖的条件下，所食食品放置时间较长，从而引起食物中毒。传统常规检测诊断方法是要经过标本采集、分离鉴定、生化鉴定、血清学试验、肠毒素试验才能确诊。整个检测过程耗时长、传统生化鉴定试验周期长，操作繁琐，一般需要5-6天，灵敏度不高，试剂质量无法保证，严重影响了致病菌确认工作、选择性分离培养的培养基上挑选可疑菌落需要经验，存在漏检的可能，对快速准确诊断，抢救病人带来极大的不便，本发明打破传统常规分步检测手段，在快速鉴别诊断食物中毒致病菌大肠埃希氏菌0157的应用上具有明显的优势。本发明是将培养增菌液中增加了特异性的大肠埃希氏菌0157多价及单价血清，使检测确诊过程缩短至2-6小时，增菌时能够利用特异血清的血清凝集反应，鉴定的准确率均在97％以上。检测致病菌时耗时少、灵敏度高，准确性强。

发明内容

本发明的要点在于选择合适的培养基组分，并进行合理混配，经加温、溶解、混合、冷却、分装、高温灭菌、无菌制备血清等工艺而成一种引起食物中毒大肠埃希氏菌0157快检试剂。

本发明选择的快检试剂配方如下(克/每升蒸馏水)蛋白胨10.0-12.0；牛肉膏3.5-4.5；氯化钠4，5.0-5.5；复合生长因子10.0-20.0；琼脂3.5-4.0；无菌大肠埃希氏菌0157多价及单价血清10-20ml；蒸馏水加至1000mL，调pH7.1