[发明专利]一种抗病、高产棉花的育种方法及应用

权利要求书

1、一种利用抗病芽孢杆菌作为内生菌，培育抗病、高产棉花的育种方法，其特征在于：

(1)处理方法A——拌种：用芽孢悬液浸泡棉花种子。

(2)处理方法B——灌根：棉株发芽后用芽孢悬液灌根。

(3)处理方法C——注射：用芽孢悬液注射棉株茎基或果实幼体。

(4)处理方法D——拌种结合灌根：用芽孢悬液浸泡棉花的种子，棉株发芽后用芽孢悬液 灌根。

(5)处理方法E——拌种，灌根结合注射：用芽孢悬液浸泡棉花的种子，棉株发芽后用芽 孢悬液灌根，芽孢悬液注射棉株茎基或果实幼体。

2、一种棉花根、茎、叶和种子中内生有枯草芽孢杆菌的鉴定方法，其特征在于棉花的根、茎、 叶和种子中分离出的单菌落，需同时满足以下两个条件，具体步骤如下：

(1)菌落形态检测：菌株细胞杆状，产生芽孢，中生，营养琼脂培养基上菌落无光泽、粗 糙、边缘不整齐、凸起，菌落呈褶皱状。革兰氏染色、过氧化氢酶反应和V-P反应呈 阳性。能利用葡萄糖、甘露糖，木糖醇，利用葡萄糖不产气，利用半乳糖不产酸，能 水解明胶、酪素。

(2)16S rDNA序列测定：从棉花的根、茎、叶和种子中，分离出的菌落形态符合权利要 求2中(1)的菌落形态特征的单菌落，菌落培养液经引物27f：5′-gagagtttgatcatggctcag-3′ 和1541R：5′-cgggatccaaggaggtgatccagcc-3′，PCR扩增获得的1479bp核酸片段序列， 与序列表中SEQ ID NO：1有97％以上的同源性。

3、权利要求1中所述的抗病芽孢杆菌，其中的一种是指枯草芽孢杆菌B111，棉株中内生有 该菌的鉴定方法，其特征在于棉株的根、茎、叶和种子中分离出的单菌落，除满足权利要 求2所述的两个条件以外，同时满足以下条件：

(1)利用枯草芽孢杆菌B111的抗菌蛋白基因bs2核酸片段序列进行鉴定：从棉花的根、茎、 叶和种子中分离出的单菌落培养液，利用引物F1：5’-acggtctcattaaataattcttctgaa-3’，R1： 5’-acgatagtaaatctgctccgcttt-3’，以菌体基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得729bp核 酸片段序列，完全符合序列表中SEQ ID NO：2。

4、权利要求1、2和3所述的方法适用于植物抗病、高产品种的选育。

5、权利要求4中所述的植物是指单子叶植物和双子叶植物。

6、采用权利要求1中所述的不同处理方式的组合技术，选出的抗病、高产棉花品种及后代， 黄萎病病情指数在5-30，产量增幅15％-40％。