[发明专利]一种牛乳中乳铁蛋白含量的检测方法

权利要求书

1.一种检测乳铁蛋白含量的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)将乳铁蛋白溶于样品缓冲液，制备得到多个不同含量乳铁蛋白的标准溶液，并对多个溶液分别检测后得到乳铁蛋白含量与检测结果之间的标准曲线；2)对样品进行检测，并得到检测结果；3)将所述的检测结果与所述的标准曲线比对，得到样品中乳铁蛋白的含量；其中，检测样品的设备是高压毛细管电泳分析仪。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤1)中标准曲线的制定的方法优选如下：配制乳铁蛋白标准溶液，在样品缓冲液中溶解乳铁蛋白标准物质配制成分别为1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml，制备得到标准溶液，摇匀后使用高压毛细管电泳分析，得到检测结果，即得到乳铁蛋白含量与平均校正因子的关系曲线；其中，所述的检测结果按照如下方法计算：按峰面积计算出平均校正因子。

3.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：把标准溶液或待检测样品装入离心管中，在2000-6000r/min离心条件下离心5-15min，将样品与缓冲液按照1∶4-20的比例加入冻存管(或其他容器)，并摇匀，精确提取10-200ul处理样品加入样品管中，放置于超声波清洗机1～10min，使用毛细管电泳仪测定。

4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述的样品缓冲液为：能够使蛋白质分散的缓冲液，优选如下缓冲液：

160m mol/L三甲基氨基甲烷缓冲液中加40m mol/L 3-吗啉代丙烷磺酸，60mmol/L乙二胺四乙酸二钠，7mol/L尿素，处理样品时添加5ul/ml的β-巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素0.05％，pH值为8.5

5.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述的摇匀步骤采用漩涡混合器。

6.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：所述高压毛细管电泳分析的使用检测参数如下：毛细管电泳检测检测的温度控制在15～40℃之间，毛细管柱直径25～75μm、长度20～600mm，DAD(或紫外光)检测器，压力进样(或电动进样)，压力为0～1psi，进样时间为1s～20s，分离温度为15～40℃，工作电压为7～30kV。

7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述的毛细管柱为石英毛细管柱，包括涂层和未涂层。

8.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：所述的高压毛细管电泳分析的检测时电泳模式为区带电泳，其电泳缓冲液为pH2.0～9.0，主要成分为无机盐缓冲液，优选：磷酸盐、硼酸或柠檬酸。

9.根据权利要求2中所述的检测方法，其特征在于：所述的检测结果的处理方法如下：检测结果为样品分离的图谱，运用毛细管电泳仪所带的分析软件，积分各峰的面积，计算出试样浓度，再乘稀释倍数，即得实际浓度。