[发明专利]尾叶香茶菜中萼西香茶菜甲素的制备新工艺

说明书

技术领域

本发明属于天然药物领域。本发明涉及一种以尾叶香茶菜Isodon excise(Maxim.)Hara茎叶为原料制备萼西香茶菜甲素(Kamebakaurin)的新工艺，其纯度达到98％以上。此种化合物为二萜类物质，结构类型属于贝壳杉烷型，在其分子结构内存在环外亚甲基环戊酮的结构，此类化合物可以作为抗肿瘤药物的前导化合物。

背景技术

尾叶香茶菜Isodon excisa(Maxim.)Hara，又名龟叶草、狗日草、野苏子，性凉味甘，为多年生草本植物，分布于我国的吉林、山西、陕西、甘肃等省，在亚洲的朝鲜、苏联和日本也有一定的分布，生长海拔为550-1100m，大部分生长于草丛、路边、林中和林缘等阴生地带，具有分布广，产量大的特点。作为香茶菜属众多植物中的一种，尾叶香茶菜同样具有良好的生理活性，在我国民间很早就被用来治疗风湿感冒、咽喉肿痛、胃炎、膀胱胀痛、关节疼痛、经闭、乳腺炎、跌打损伤、蛇虫咬伤等，该植物还具有明显的抗癌生理作用，主要取决于其主要成分——二萜类化合物。此类二萜类化合物最大的一个结构特点就是具有一个环外亚甲基环戊酮的环状结构。已有大量的分子结构与药效关系研究实验证明，大部分的香茶菜属植物所具有的良好抗癌活性，其活性中心就是这个环外亚甲基环戊酮的环状结构。

对具有药效的香茶菜属植物的化学成分研究，始于日本学者八木等于1910年从延命草中分离得到结晶苦味质plectranthin。1958年Takahashi等首次从延命草中(Isodon.japonica)中分离得到具有抗病毒作用的的贝壳杉烯型二萜(ent-kaurene diterpene)类化合物延命素(enmein)，由于这些苦味二萜化合物对革兰氏阳性菌呈现高度选择的抗菌活性和抗肿瘤活性，因此，从二十世纪八十年代起唇形科香茶菜植物化学成分的研究非常活跃。到目前为止，人们从尾叶香茶菜中共分离鉴定了23个二萜类成分。

目前获得以上成分的手段均是应用经典的提取分离方法，即选择不同极性的有机溶剂作为提取溶媒，获得不同极性的组分，不同组分再通过硅胶柱进行单体化合物的分离。

1、二萜类化合物的提取

甲醇或乙醇提取，醇提取液浓缩至一定体积，并调整适当的醇浓度，再用不同极性的亲脂性有机溶剂按极性由小到大的递增顺序依次萃取，得到不同脂溶性的萜类提取物。

2、二萜类化合物的分离

(1)柱色谱法分离常用的吸附剂为硅胶、中性氧化铝，其中硅胶应用最广。常用的洗脱剂多以石油醚、正己烷、环己烷等溶剂或用氯仿-乙醇洗脱。

(2)结晶法分离将其提取液浓缩，再用适当溶剂或方法重结晶。

采用上述提取方法获得萼西香茶菜甲素(Kamebakaurin)单体纯品量较少，不能满足生产和科研需要。

发明内容

本发明涉及一种以尾叶香茶菜Isodon excise(Maxim.)Hara茎叶为原料制备萼西香茶菜甲素(Kamebakaurin)的新工艺，其纯度达到98％以上。此种化合物为二萜类物质，结构类型属于贝壳杉烷型，在其分子结构内存在环外亚甲基环戊酮的结构，此类化合物可以作为抗肿瘤药物的前导化合物。本发明的目的是为满足生产和科研上的需求量，提高收率，降低成本。

(1)本发明是将尾叶香茶菜茎叶中的杂物除去，然后烘干或晒干，粉碎成40目粉末，采取超声波提取法，提取频率为100Hz，温度为50℃，提取时间为30min，提取3次，提取溶剂为70％的乙醇。

(2)将(1)中的70％的乙醇提取液合并，减压浓缩至小体积，用石油醚脱脂后，加入2倍体积量的水，放入冰箱内12h后，离心，得上清液。

(3)将(2)中的上清液通过D₁₀₁大孔吸附树脂柱吸附，先用水洗，去除部分色素和杂质，然后再分别用浓度为10％、40％、60％的乙醇溶液洗脱，分部收集乙醇洗脱液。

(4)将(3)中的60％乙醇洗脱液回收乙醇溶剂，获得土黄色粉末。

(5)将(4)中的土黄色粉末拌入等量的反相树脂，上JTY-1反相树脂柱。用20％-30％乙醇溶液洗脱，合并乙醇溶液，回收乙醇溶剂后，得白色粉末。

(6)将(5)中的白色粉末再进行硅胶柱层析，用溶剂系统氯仿∶丙酮∶乙酸乙酯＝3∶1∶1溶液洗脱，洗脱溶液放置，有结晶状物质析出。

(7)将(6)中的结晶状物质以95％乙醇进行重结晶，得到化合物萼西香茶菜甲素(Kamebakaurin)，其纯度达到98％以上。

根据本发明，本发明中的“％”是重量百分比。

具体实施方式