[发明专利]动物源性食品中磺胺类药物残留的基质固相分散－高效液相色谱测定方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全-兽药残留领域，特别是动物源性食品中磺胺类药物残留检测的一种方法。

背景技术

磺胺类药物(sulfonamides，SAs)是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类传统的人工合成抗菌药物。它与对氨基苯甲酸(PABA)的化学结构相似，二者竞争二氢叶酸合成酶，抑制细菌二氢叶酸的合成，影响细菌核酸生成，进而阻止了细菌的生长繁殖。磺胺药物抗菌谱较广，对大多数革兰阳性菌和某些革兰阴性菌有抑制作用。在动物饲养过程中，磺胺类药物常用于治疗家畜子宫炎、呼吸道和消化道感染、猪萎缩性鼻炎、禽霍乱、伤寒、副伤寒和球虫感染。磺胺类药物在动物体内的作用时间和代谢时间较长，往往造成动物可食性组织中有磺胺类药物残留，而长期食用有磺胺类药物残留的食品，就可能引起磺胺类药物在体内的逐渐蓄积，对人类的健康有害[李俊锁，邱月明，王超，兽药残留分析[M]，2002，228-251；段振娟，张鸿雁，王硕，动物性食品中磺胺类药物残留分析研究进展[J]，食品研究与开发，2007，28(6)：149-153]，主要表现为变态反应与过敏反应、细菌耐药性、致畸作用、致突变作用、致癌作用以及激素样作用。而且食品、饲料中的残留极易引发细菌的耐药性和环境污染。动物排泄物中的抗菌药物和耐药性菌株被释入环境后，将污染水源和土壤，在污泥中细菌可长期保持耐药性。同时，磺胺类药物残留也是目前动物性产品贸易的主要技术问题，严重影响了畜牧业的正常发展。

为了保障动物用药的安全性和有效性，以及人类摄食动物性食品后的安全性，许多国家规定了磺胺类药物的最高残留限量(maximum residue limits，MRL)，加拿大、欧盟、美国规定动物组织中磺胺类药物总量的最大残留量是100μg/kg，日本为20μg/kg。根据我国农业部1998年制定的“兽药及其他化学物质在动物可食性组织中残留检测方法”，磺胺类药物在可食性动物组织中的允许残留标准为100μg/kg～300μg/kg。几十年来，国内外对SAs残留的分析进行了深入全面的研究，出现了许多检测磺胺类药物的方法。目前有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、薄层色谱法(TLC)、高效毛细管电泳法(HPCE)、酶联免疫分析法(ELISA)、微生物法、生物传感器免疫分析法(BIA)、分光光度法(UV)、荧光法(FL)、气相色谱-质谱法(GC/MS)、液相色谱-质谱法(HPLC/MS)和超临界流体色谱法(SFC)等方法。研究最多的动物性食品有肌肉、肝脏、肾、皮和脂肪，最常见的分析物为磺胺二甲基嘧啶(SMZ)、磺胺嘧啶(SDZ)、磺胺甲基嘧啶(SMR)和磺胺噻唑(STZ)[段振娟，张鸿雁，王硕，动物性食品中磺胺类药物残留分析研究进展[J]，食品研究与开发，2007，28(6)：149-153]。在磺胺类药物的诸多检测方法中，HPLC方法具有灵活、通用、选择性强、灵敏度高、检测限低等优点。HPLC方法主要用C₁₈和C₈反相柱，有时也用离子对柱。常用的流动相为磷酸-乙腈梯度洗脱[刘宏程，黎其万，佴注，等，HPLC测定动物组织中己烯雌酚、呋喃唑酮、磺胺类药物残留[L]，化学通报，2006，(1)：66-69；万春花，龙洲雄，胡海山，等，RP-HPLC法同时测定动物组织中十五种磺胺类药物残留[J]，食品科学，2007，28(10)：493-496；曹芳，王茜，谢世红，高效液相色谱法测定鸡肉中的磺胺类药物残留[J]，江西饲料，2005，(1)：25-26]，甲酸-乙腈梯度洗脱[陈振桂，占春瑞，郭平，等，高效液相色谱法同时测定水产品中13种磺胺类药物残留的研究[J]，食品科学，2007，28(10)：448-451]，甲醇-磷酸盐缓冲液-三乙胺[刘芃岩，姜宁，王洪宇，固相萃取-高效液相色谱法同时测定猪肉中磺胺类和氟喹诺酮类兽药残留量[J]，化学通报，2006，(8)：572-576]，甲醇-乙腈-水-乙酸[张艳，吴银良，固相萃取-高效液相色谱法测定动物肉组织中磺胺类药物的残留[L]，色谱，2005，23(6)：636-638；林红英，陆桂萍，沈子龙，猪肉中磺胺二甲基嘧啶残留量的高效液相色谱法测定[L]，江苏农业学报，2006，22(3)：285-288]，甲醇-乙酸[宋艳红，王冉，刘铁铮，高效液相色谱法测定蛋清和蛋黄中五种磺胺类药物残留[L]，浙江农业学报，2007，19(1)：42-45]；甲醇-甲酸梯度洗脱[吴宗贤，沈崇钰，陈惠兰，等，高效液相色谱-串联质谱法测定肠衣中17种磺胺类药物残留量[L]，分析试验室，2007，26(5)：96-99]等。流动相的pH值对磺胺类药物的保留时间影响很大，因为磺胺类药物结构式中含有氨基，具有弱碱性，调节流动相中的pH，可以抑制弱碱的离解，从而导致保留时间的改变，因此在HPLC检测中，必须保持流动相pH的稳定，pH变化则可能引起分析结果和分离效果的变化。例如用RP-HPLC法同时测定动物组织中十五种磺胺类药物残留时[万春花，龙洲雄，胡海山，等.RP-HPLC法同时测定动物组织中十五种磺胺类药物残留[J]，食品科学，2007，28(10)：493-496]，结果表明在乙腈-水中加入磷酸，可有效地抑制色谱峰拖尾，且有利于磺胺噁唑与磺胺二甲嘧啶的分离，但加入磷酸多了，磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲噻二唑很难分开。HPLC方法常用的检测器有紫外-可见检测器(UV)、荧光检测器(FLD)、光二极管阵列检测器(DAD)和质谱(MS)。紫外-可见的检测波长通常选为270nm～280nm，有时为255nm。荧光检测的激发波长为405nm～420nm，发射波长为485nm～495nm。光二极管阵列通常选267nm、268nm或263nm的波长。MS具有高特异性并且可以确证被分析物。