[发明专利]一种检测甲状腺过氧化物酶自身抗体的化学发光免疫分析测定试剂盒

权利要求书

1、一种甲状腺过氧化物酶自身抗体(TPOAb)化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：甲状腺过氧化物酶自身抗体校准品、甲状腺过氧化酶抗原包被的微孔板、生物素化的甲状腺过氧化物酶抗原、辣根过氧化酶标记的链亲和素、上述辣根酶所作用的化学发光底物液以及25倍浓缩洗涤液。

2、如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物液包含A液和B液，其中：

所述化学发光底物A液，包括10mM鲁米诺、0.3mM 4-羟基联苯、0.05mM 4-碘苯硼酸、0.2M pH8.7硼酸-硼砂缓冲液，其pH值为8.0～10.0；

所述化学发光底物B液，包括3.5mM过氧化脲、0.1％ Tween20、0.2M pH7.2磷酸盐缓冲液，其pH值为7.0～7.6；

使用前将A液与B液按1：1比例混合后使用。

3、如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述25倍浓缩洗涤液包含0.25M pH7.4磷酸盐缓冲液、20％ NaCl、0.1％ Tween-20、0.1％ Proclin 300，调整pH至7.2～7.4，使用时用蒸馏水稀释25倍。

4、一种制备权利要求1所述试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤：

a)以甲状腺过氧化物酶自身抗体配制校准品；b)以甲状腺过氧化物酶抗原包被微孔板；c)生物素化标记甲状腺过氧化物酶抗原；d)用辣根过氧化酶标记链亲和素；e)配制化学发光底物液；f)配制25倍浓缩洗涤液；g)分装组分并组装为成品。

5、如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述甲状腺过氧化物酶抗原包被微孔板的步骤b)采用以下方法：采用0.05M pH7.2的PBS缓冲液与适当浓度的甲状腺过氧化物酶抗原混合制成包被液，并将其负载于微孔板上；用洗涤缓冲液洗涤后，再用水解明胶封闭液进行封闭2小时，干燥封板后保存备用。

6、如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述水解明胶封闭液包含：1.28mM NaH₂PO₄·2H₂O，8.10mM Na₂HPO₄·12H₂O，1.0％水解明胶，0.1％Proclin300，其pH为7.2～7.4。

7、如权利要求4所述的方法，其特征在于，在所述制备生物素标记TPO抗原的步骤c)中是通过生物素琥珀酰亚胺酯在微碱性条件下与抗原发生偶联反应而实现的。

8、如权利要求4所述的方法，其特征在于，在所述以辣根过氧化酶标记链亲和素的步骤d)中，采用改良的戊二醛法以辣根过氧化酶标记链亲和素。

9、如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述化学发光底物液包含A液和B液，其中：

所述化学发光底物A液，包括10mM鲁米诺、0.3mM 4-羟基联苯、0.05mM 4-碘苯硼酸、0.2M pH8.7硼酸-硼砂缓冲液，其pH值为8.0～10.0；

所述化学发光底物B液，包括3.5mM过氧化脲、0.1％ Tween20、0.2M pH7.2磷酸盐缓冲液，其pH值为7.0～7.6；

使用前将A液与B液按1：1比例混合后使用。

10、如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述25倍浓缩洗涤液步骤f)包含0.25M pH7.4磷酸盐缓冲液、20％ NaCl、0.1％ Tween-20、0.1％ Proclin 300，调整pH至7.2～7.4，使用时用蒸馏水稀释25倍。