[发明专利]雷公藤单体化合物在提高腺相关病毒载体介导的基因表达效率及其对神经退行性疾病的辅助治疗中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及中药单体化合物的一种新医药用途，尤其涉及中药雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)单体化合物在提高腺相关病毒载体介导的基因表达效率中的用途，本发明还涉及雷公藤单体化合物在辅助治疗神经退行性疾病中的用途，属于生物医药领域。

背景技术

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是多发于中老年人群的中枢神经系统退行性疾病。在我国，其发病率呈逐年增加趋势。PD主要的病理特征是黑质致密部的多巴胺能神经元的进行性退变，导致纹状体多巴胺含量降低。其典型的临床表现为震颤、肌僵直和运动徐缓三大症状，严重影响了患者及其家庭的生活质量。目前，针对PD的药物替代及外科手术疗法虽然可获得一定疗效，但所引发的副作用也同时给患者的健康带来相当的危害，因而探索包括基因治疗在内的新型PD治疗手段迫在眉睫。

以病毒载体为基础的基因治疗替代疗法，在帕金森病的治疗中有较好的前景(Gene therapy in Parkinson’s disease.O.Eberhardt.J.B.Schulz.Cell TissueRes.(2004))，其原因如下：(1)PD的病理基础比较明确，是由于多巴胺能神经元的选择性功能丧失导致多巴胺缺乏所致的病变；(2)病灶局限于黑质纹状体系统，从而使准确的立体定位治疗成为可能；(3)具备成熟的PD动物模型可供临床疗效和安全性评价。

基因治疗成功实施的前提是构建安全有效的基因载体，基因工程病毒载体相比于非病毒类载体，在携带外源基因的表达方面显示了无可比拟的高效率，成为基因治疗载体中的首选。但是，野生型病毒由于其免疫原性、宿主基因组整合、突变特性等潜在的危险，使其直接应用于科研或临床治疗受到了限制。为了解决上述问题，科研者通过对病毒结构解析，利用分子生物学技术，制备基因工程重组病毒载体。它具备如下多种优点：(1)感染效率高，与相同剂量的非病毒类基因载体比较，可以转化数个数量级以上的细胞；(2)转化细胞的效果稳定，不易受病毒批次、宿主状态和外界因素干扰；(3)能够长效表达外源基因；(4)可嵌入多种转录调节元件，对载体功能进行优化；(5)一定的细胞靶向性，不同类型病毒类感染不同种类细胞时表现出各自特异嗜性。

在基因治疗或科研中，常用到的重组病毒载体主要有以下三类，即：腺病毒(Adenovirus，Ad)、逆转录病毒(Retrovirus，RV)和腺相关病毒(Adeno-associated virus，AAV)。其中，腺病毒的免疫原性较强，即使在重组改造后，仍然可发生由于大剂量使用而引发的严重免疫反应致患者死亡的病例(M Wadman.NIH panel to limit secrecy on gene therapy.Nature，1999；402(6757)：6.)；而逆转录病毒只能转导处于分裂期的细胞，完全不适用于非增殖性的中枢神经元，而且还有在基因组中随机整合的潜在风险，在临床试验中已有受试患者出现白血病样反应的相关报道。相比之下，AAV具有以下几方面的优势：(1)无毒性及低免疫性：自发现至今，尚无引起相关疾病的报道。而且近代对AAV的应用从最初的野生型病毒过渡到了新的重组病毒，去除了参与病毒进行自主复制的元件，应用更加安全；(2)对中枢神经系统具有易感性：2型腺相关病毒(adeno-associated virus of serotype 2，AAV2)在同样条件下对不同组织进行感染，对中枢神经系统神经元具有天然嗜性，感染效率最高，更使之成为PD治疗的首选；(3)对分裂及非分裂细胞均可感染：由于神经细胞属于不分裂的终末分化细胞，多数病毒载体不能成功感染。而AAV对分裂及非分裂细胞均可感染，所以AAV在中枢神经系统基因治疗中一枝独秀；(4)长效表达所携带的外源基因：AAV可以在体内长效表达外源基因，有实验证明在大鼠脑内至少可持续表达19个月，与其天然寿命相当，而在灵长类动物脑内也持续表达至少42个月；(5)感染细胞或组织时没有野生病毒基因的表达：重组腺相关病毒载体去除了病毒本身的基因组，所以在进入宿主细胞表达外源基因时不会产生病毒本身的基因，减少了由于病毒自我复制及在宿主基因组中整合带来的潜在风险。