[发明专利]石斛兰原生种胚培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种兰科植物的培养方法，尤其涉及一种石斛兰原生种胚培养的方法。

背景技术

石斛兰属(Dendrobium)是兰科(0rchidaceae)植物中，原生种数量仅次于石豆兰属的第二大属，目前已发现有81个种(亚种)。全球分布区域北至印度、缅甸、中国以及日本，南至印度尼西亚、巴布亚新几内亚、澳大利亚和新西兰，马莱群岛和菲律宾群岛。石斛属植物具有较高的药用价值和观赏价值。作为药材的石斛兰，其药用价值有生津、止咳、润喉等功效。作为观赏的石斛兰，既美丽又芳香，是世界著名的花卉。

石斛兰附生于高山岩石和树上，近年来由于森林的破坏、环境变化及大量毁灭性的采收，使得野生石斛兰资源遭到严重破坏，种群数量和分布急剧减少。

石斛兰果实为蒴果，冬春季经过授粉，几个月后果实变为黄绿色，基本成熟。后随着成熟度的增加，种子变为淡黄色，后果皮干裂种子散出。每个果实中含种胚上万至几十万粒，种子胚小，种皮宽大，呈纺锤型。是一团未分化的胚细胞，不含胚乳，只达圆球胚阶段，无子叶、胚根、胚芽，没有贮藏营养物质的组织，极难萌发。

现有技术中主要的石斛兰繁殖手段集中在利用高芽分株和扦插等无性繁殖上。

上述现有技术至少存在以下缺点：对母株的依赖性较强，因母株数量和生长量有限，导致种苗繁殖缓慢、株间差异大、种苗不整齐。

发明内容

本发明的目的是提供一种繁殖快、株间差异小、种苗整齐的石斛兰原生种胚培养方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的石斛兰原生种胚培养方法，包括步骤：

首先，采集种胚已成熟、果荚未开裂的石斛兰蒴果，进行表面消毒处理；

然后，切开果皮取出种胚；

之后，将所述种胚植入已灭菌培养基中培养。

由上述本发明提供的技术方案可以看出，本发明所述的石斛兰原生种胚培养方法，由于首先采集种胚已成熟且果荚未开裂的石斛兰蒴果，进行表面消毒处理后，切开果皮取出种胚；之后，直接将种胚植入已灭菌培养基中培养。繁殖快、株间差异小、种苗整齐。

具体实施方式

本发明的石斛兰原生种胚培养方法，其较佳的具体实施方式是，首先，采集种胚已成熟、果荚未开裂的石斛兰蒴果，进行表面消毒处理；然后，切开果皮取出种胚；之后，将种胚植入已灭菌培养基中培养。

在进行表面消毒处理时，可以先将石斛兰蒴果用70％左右的乙醇擦洗1～2min，再用约10％的次氯酸钙上清液浸泡20min左右，之后用无菌水冲洗2～4次左右。

切开果皮取出种胚后，将种胚植入已灭菌培养基中的方法包括两种：

一种是将种胚浸入无菌水中摇匀，用无菌吸管将所述种胚带水吸出，以微滴形式均匀的滴入所述培养基中；另一种是将种胚以粉末状均匀撒在所述培养基表面。种胚植入的培养基可为N₆培养基。

当种胚植入已灭菌培养基中培养大约3个月后，可生成种胚苗，然后可将种胚苗移入继代培养基中培养。继代培养基为N₆培养基，可在培养基中附加0.2～0.3％的活性炭、1.5～2.5％的蔗糖、0.6～1.0％的琼脂等。

种胚苗移入继代培养基中培养8～10周之后，再移入生根壮苗的培养基中培养6～8周。生根壮苗的培养基为MS+萘乙酸+6-苄基嘌呤0.5mg/L。根据需要也可以选用其它的培养基。

种胚从植入到培养成苗过程中的培养条件为：培养温度25℃～28℃，每日光照10～12小时，光照强度1600～2000勒克斯。

本发明提供的石斛兰原生种胚的无菌胚培养技术可应用于石斛兰原生种、杂交种的种苗生产、保存和育种工作中，下面通过具体实施例对本发明的方法进行详细描述：

石斛兰蒴果在种子成熟未开裂前，蒴果内种子成熟到可相互分离，容易播种，不致播种成块状。另外灭菌容易，只对果实表皮灭菌，萌发也快。蒴果开裂后，粉末状种子灭菌较为困难。切取蒴果注意勿切破果实，防止灭菌的液体渗入果实中，导致果实种子连成块，给播种增加难度。胚培养以不开裂的果荚进行消毒比较容易。