[发明专利]乳腺特异性表达载体及其构建方法

权利要求书

1.乳腺特异性表达载体的构建方法，包括如下步骤：

1)构建DNA片段M₀；M₀自上游至下游依次为同源臂T₁、同源臂T₂、同源臂T₃、同源臂T₄、同源臂T₅、同源臂T₆；所述6个同源臂的长度均为400-600bp；同源臂T₅和同源臂T₆能通过与乳蛋白BAC同源重组获得乳蛋白基因座3’调控区；同源臂T₃和同源臂T₄能通过与外源目的蛋白BAC同源重组获得完整的外源目的蛋白基因组序列；同源臂T₁和同源臂T₂能通过与乳蛋白BAC同源重组获得乳蛋白基因座5’调控区；

2)将所述DNA片段M₀插入载体中，得到连续三次基因抓捕载体；

3)通过与所述乳蛋白BAC进行两次同源重组、与所述外源目的蛋白BAC进行一次同源重组，将步骤2)得到的连续三次基因抓捕载体中的DNA片段M₀替换为DNA片段M₁，得到所述外源目的蛋白的乳腺特异性表达载体；M₁自上游至下游依次为所述乳蛋白基因座5’调控区、完整的所述外源目的蛋白基因组序列、所述乳蛋白基因座3’调控区。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述乳蛋白基因座为牛、羊、猪、马、兔、人或鼠的乳蛋白基因座。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述乳蛋白基因座为羊β-酪蛋白基因座、牛β-酪蛋白基因座、小鼠WAP基因座、兔WAP基因座、奶牛αs1-酪蛋白基因座、奶牛αs2-酪蛋白基因座、人乳白蛋白基因座或山羊β-乳球蛋白基因座或牛β-乳球蛋白基因座。

4.如权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述外源目的蛋白为人血清白蛋白。

5.权利要求1至4中任一所述方法在制备乳腺生物反应器中的应用。