[发明专利]应用新型全血样品垫处理方法的免疫层析检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明应用新型全血样品垫处理方法的免疫层析检测试剂盒涉及一种新型全血样品垫的处理方法和用此技术制备的免疫层析试剂盒及其检测方法，其成本低廉、操作简便、诊断快速、安全可靠，可广泛应用于同时检测全血/血清/血浆样本的免疫层析检测试剂盒。

技术背景

免疫快速检测试剂为适应同时检测人或动物全血和血清样本的要求，一般采用在样品垫上附着一定孔径的聚酯材料以实现血细胞、血清的分离和检测同时进行。其工作原理是当血细胞体积大于或等于聚酯材料孔径而被过滤，血清得以通过。该聚酯材料已有商品化产品，如：Gelman Sciences Inc.的水平红细胞分离材料、垂直红细胞分离材料和Whatman公司的全血滤膜。该方法应用于检测时全血样本使用量大，分离速度慢，价格昂贵。国内专利(CN1243251A)提供了另一种瞬间分离血细胞和血清的方法，即在全血中混入山羊抗红细胞血清，红细胞凝集成团被玻璃纤维垫完全阻挡，血清透过玻纤垫并通过反应膜的毛细作用沿反应膜向吸水垫端移动。此种方法具有样本用量小价格便宜等优点，但不同来源不同批次山羊抗红细胞血清质量差异大，易失效，生产工艺复杂不易掌握。因此开发一种简便、有效、样本用量小的快速分离血细胞和血清的方法对于免疫层析检测试剂盒的制备十分必要。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种新型的全血样品垫的处理方法，并利用该项技术制备适用于同时检测全血/血清/血浆的免疫层析检测试剂盒。

本发明所说一种新型全血样品垫的处理方法可通过以下技术方案实现：

1.非生物活性凝血激活剂与含磷脂类以及钙离子Ca²⁺溶液按照如下方法配制：

1～50g/L非生物活性凝血激活剂

0.5～4g/L磷脂

0.1～0.5mmol/L Ca²⁺

2.将上述制备所得溶液均匀分散在样品垫上，烘干，即得全血样品垫。

本发明所说非生物活性凝血激活剂包括：白陶土(又称高岭土、高锰粉)、鞣花酸、二氧化硅微粒中的一种或几种。

本发明所说磷脂包括：磷脂酰胆碱(PC，又称卵磷脂)，磷脂醇(PA)、磷酯酰肌醇(PI)、磷脂酰甘油(PG)，神经鞘磷脂(SPH)，磷脂醇(PA)，磷脂酰乙醇胺(PE，又称脑磷脂)中的一种或几种。

本发明所说样品垫材质为聚酯膜、玻璃纤维素膜、纤维素滤纸、无纺布中的一种或复合材质。

本发明所说一种应用新型全血样品垫处理方法的免疫层析检测试剂盒可通过以下技术方案实现：

1.用本发明所说技术方案制备全血样品垫；

2.制备免疫层析用标记物；

3.标记抗体或抗原的交联及固相化；

4.在免疫膜上固定捕捉抗体或抗原或质控线抗体；

5.将背板、全血样品垫、标记物垫、免疫膜和吸水滤纸按照附图所示装配成免疫层析试剂盒。

6.使用方法：将1～2滴全血样本滴于样品垫上同时加入等体积的样本稀释液。血液在样品垫上迅速凝集，被稀释的血清因毛细作用透过样品垫并向吸水纸端移动，可在30分钟内完成检测反应。

本发明所说免疫层析检测试剂盒由背板、全血样品垫、标记物垫、免疫膜和吸水滤纸组成，其中底衬可为聚氯乙烯材料；标记物垫可为聚酯或玻璃纤维素材料并载有抗原抗体标记物；免疫膜可为硝酸纤维素或醋酸纤维素材料。

本发明所说免疫层析用标记物可为胶体金颗粒、乳胶颗粒或荧光纳米颗粒等。

本方法所说抗原抗体标记方法和固定方法均为制备免疫层析试剂常规方法。

本发明所说样本稀释液为pH值在5～8范围内具备一定离子强度水溶液，可为生理盐水、Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液和硼酸-硼砂缓冲液等。

本发明采用廉价、无生物活性的凝血激活剂与含磷脂类按照所需比例混合分散在样品垫上，即得全血样本垫，优越性在于生产工艺简单、成本低、使用无生物活性的物质降低了批间差，延长了样品垫的保存时间。大量实验数据表明，使用此种全血样品垫处理方法的免疫层析检测试剂盒，样本用量小、滤血速度快，可用于同时检测全血、血清和血浆样本，其检测卡(条)的特异性、灵敏度等符合临床检测要求。

附图说明

附图，免疫层析试剂盒组装示意图。

其中，1-背板、2-全血样品垫、3-标记物垫、4-免疫膜、5-吸水滤纸、6-检测线(T线)、7-质控线(C线)

具体实施方式