[发明专利]一种检测沙眼衣原体的质控物

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测沙眼衣原体的质控物，属于临床检验学和生物技术领域。

背景技术

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，CT)是重要的性传播疾病的病原体之一，它不仅会导致阴道、尿道感染；上行的生殖道感染还可能累及子宫内膜、输卵管和邻近的盆腔结构，也能导致盆腔炎、输卵管损伤直至不孕。此外，此种病原体还与人乳头瘤病毒(HPV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)的感染有关。

衣原体为革兰氏阴性病原体，是一种专性细胞内寄生的微生物，没有合成高能化合物ATP的能力，必须由宿主细胞提供，因而是能量寄生物。衣原体是一类能通过细胞滤器，有独特发育周期、严格细胞内寄生的原核细胞型微生物。沙眼衣原体是一种比病毒大、比细菌小的原核微生物，呈球形，直径只有沙眼衣原体0.3～0.5mm。Ct的基因组为1.5kb左右的双链DNA，属于基因组最小的原核生物之一，仅为大肠杆菌的1/3。其RNA的主要成分是21、16、4srRNA。所有的Ct都含有7.5kb的隐蔽性质粒，并且发现这种质粒与其它生物间没有同源序列。

传统检测方法包括：

(一)细胞培养方法：由于Ct的专性细胞寄生性，一般培养法不能使其生长，只有在活的细胞内才能增殖、复制。组织细胞培养法分离Ct多采用McCoy细胞或Hela细胞。细胞培养方法被认为是评价其他方法的“金标准”，也是WHO推荐的主要法之一。但是由于各个实验室操作步骤有所不同，没有标准化，且培养法对样品的预处理要求高，敏感性受标本采集、运送、保存等的影响较大、但敏感性一般较低；而分离培养操作复杂，技术及设备要求高，所需时间长，加上国内很多医院不具备细胞培养条件，因而不适于临床应用大规模检查多用于科研和疑难病例的终鉴定。

(二)非培养的诊断方法

1.直接荧光抗体测定(DFA)：将针对Ct的单克隆抗体用荧光标记，与标本中的Ct结合后，荧光显微镜检查就能见到发荧光的原体(Ebs)。DFA不象培养法必须存在有活力的Ct，但其敏感性受人群感染率的影响，且有判定结果带有主观性，荧光易淬灭，不适于检测大量标本等缺点。其与细胞培养方法相比其敏感度和特异性相似，敏感度可达到75％～85％，特异性也高于98-99％，但是与核酸扩增方法相比敏感度要低。

2.酶免检测(EIAs)：有多种应有EIAs检测临床样本中衣原体抗原的商品试剂盒应用单克隆或多克隆抗体检测衣原体的脂多糖(LPS)，其可溶性比外膜主蛋白(MOMP)好。酶免疫试剂法的主要优点是结果准确、快速易行，但与其他常见微生物产生交叉反应，如金黄色葡萄球菌、A群及B群链球菌、淋病奈瑟菌、醋酸钙不动杆菌、肺炎克雷伯菌及其他革兰阴性细菌。

3.核酸杂交技术(NAH)：应用特异性探针与模板中的特定序列进行杂交，大大增加了检测的敏感性。

4.核酸扩增(NAA)：目前，可以用于沙眼衣原体检测的NAA方法一共有5种，分别是PCR扩增法、LCR法、转换介导的扩增AMP-CT、APTIMA Combo 2、链置换扩增的探针技术(strand displacement amplification Probe Tec)。其中最常用的是聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)扩增法，该技术具有耗时少、扩增效率高、特异性强的特点，显示出了其在CT感染临床诊断中的优越性。

传统的样本采集方法为“直接采集分泌物标本”：细胞标本应在患处采用拭子或刮片的方法获取。(1)由于沙眼衣原体易感染柱状上皮细胞，所以宫颈标本的采集应在宫颈口或移行处进行，操作时，应先用1个拭子将宫颈口揩干净，然后再用一个拭子伸到宫颈管内转动或用一个刮勺(Pap刮勺取细胞)。(2)由于此种病原体还可以感染尿道，男性尿道炎患者，拭子应深入尿道2-4cm，并转动，以获取细胞。(3)阴道标本不适用于此项检查。(4)对于女性的输卵管炎的样本采集，需要在输卵管处进行针刺吸取。(5)此外，子宫内膜标本也可用于衣原体的检测。(6)脓性排除物由于其缺少感染的上皮细胞而不适用于此项检测，应该在对患处进行清洗后采取标本。