[发明专利]一种分离获得植物内生菌的方法

权利要求书

1.一种分离获得植物内生菌的方法，是经过植物预处理、表面消毒、内生菌的浸出、内生菌的分离纯化四步，其特征在于：所述的植物预处理过程为：将采集好的新鲜植物用清水洗净并将其根、茎、叶切成2厘米左右的小段；所述的表面消毒过程为：在70％乙醇与2％次氯酸钠溶液中浸泡进行表面消毒，浸泡后用无菌水冲洗5次以去除残余表面消毒液；所述的内生菌的浸出过程为：经表面消毒后的根、茎、叶小段分别在无菌条件下于纤维素酶浓度为40-60μg/mL，0.15-0.3％SDS的8-12mL灭菌PBS溶液中充分研磨，将研磨液转入50mL锥型瓶中25-35℃条件下120-180rpm振荡50-90min，得上清液和植物残渣；所述的内生菌的分离纯化过程为：在无菌条件下将内生菌的浸出过程中所得上清液、10倍和100倍稀释上清液各100μL分别涂布TSB琼脂平板；将植物残渣直接印记至TSB琼脂平板上，所有平板均于30℃恒温培养2～14天后挑取不同形态的菌落，真菌至查氏培养基，细菌至TSB固体培养基中，划线培养至纯后于-80℃保存。

2.根据权利要求1所述的一种分离获得植物内生菌的方法，其特征在于，所述的内生菌的浸出过程为：经表面消毒后的根、茎、叶小段分别在无菌条件下于纤维素酶浓度为50μg/mL，0.25％SDS的10mL灭菌PBS溶液中充分研磨，将研磨液转入50mL锥型瓶中30℃条件下150rpm振荡60min，得上清液和植物残渣。