[发明专利]一株产较高热稳定性重组β－葡聚糖酶的基因工程菌及其构建无效
| 申请号： | 200810108041.7 | 申请日： | 2008-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN101280290A | 公开（公告）日： | 2008-10-08 |
| 发明（设计）人： | 李崎;李永仙;郑飞云;刘春凤;顾国贤 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N9/42;C12N9/24;C12N15/56;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所 | 代理人： | 时旭丹;刘品超 |
| 地址： | 214122江苏省无锡市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一株产较 高热 稳定性 重组 聚糖 基因工程 及其 构建 | ||
1.一株产较高热稳定性重组β-葡聚糖酶的基因工程菌，其分类命名为大肠埃希氏菌(E.coli BL21(DE3)-pET28a(+)-bglt1)，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编码为CGMCC No.2741。
2.权利要求1所述CGMCC No.2741基因工程菌的构建，其特征是，从淀粉液化芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens SYB-001提取染色体DNA作模板，进行易错PCR扩增，引物：
PAG1-F：5’-ACATCGGATCCATGAAACGAGTGTTGCTAATTCTTG-3’
PAG1-R：5’-GTAGTCATCTCGAGTTATTTTTTTGTATAGCGCACCCAG-3’
易错PCR体系：0.5mL PCR管中按顺序加入以下试剂：10×PCR缓冲液5μL；100MgCl2 2μL；1.0mol/L MnCl2 2μL；2.5mmol/L dATP和dGTP各0.1μL；2.5mmol/L dTTP和dCTP各0.4μL；25μmol/L上下游引物各1μL；模板DNA2μL；Taq酶0.6μL；加双蒸水至总体系50μL；
易错PCR扩增条件：94℃预变性3min；94变性50s、56℃退火45s、72℃延伸1min，30个循环；
将其用BamH I和Xho I酶切后连接到大肠杆菌表达载体pET28a(+)中，得到重组载体pET28a(+)-bgl，用CaCl2法转化E.coli BL21(DE3)得到重组大肠埃希氏菌(E.coli BL21(DE3)-pET28a(+)-bglt1)CGMCC No.2471。
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