[发明专利]磷脂酶和其生产方法

权利要求书

1.生产磷脂酶的方法，其包括加工被表达的真菌肽以从C-末端裂解肽和/或从N-末端裂解肽以获得有磷脂酶活性的核心肽，其中核心肽包括：

a)下列给出的氨基酸序列：SEQ ID NO：1的氨基酸146-153，SEQ IDNO：3的氨基酸87-94，或SEQ ID NO：12的氨基酸79-86；或除了用另一个氨基酸取代单个氨基酸外与这些氨基酸序列任何一个相同的序列；和

b)位于a)给出的序列的N-末端侧的至少两个半胱氨酸残基；和

c)位于a)给出的序列的C-末端侧的至少两个半胱氨酸残基。

2.权利要求1的方法，其中被表达的肽在用编码被表达肽的DNA转化的丝状真菌宿主细胞中表达。

3.权利要求2的方法，其中宿主细胞是曲霉属，镰孢属或木霉属，特别是米曲霉，黑曲霉，镶片镰孢或里氏木霉。

4.权利要求2的方法，其中表达的肽被宿主细胞在体内加工。

5.权利要求1-4任一项的方法，其中核心肽长度为100-150个氨基酸。

6.权利要求1-5任一项的方法，其中磷脂酶具有特定的磷脂酶活性，其是表达的肽加工前活性的至少2倍。

7.权利要求1-6任一项的方法，其中被表达的肽源自Tuber，轮枝孢属，脉孢菌属，曲霉属，或Helicosporum，特别是T.borchii，T.albidum，大丽花轮支孢，V.tenerum，粗糙脉孢菌，米曲霉或Helicosporium sp.HN1。

8.权利要求1-7任一项的方法，其中当完全表达的肽序列与SEQ IDNO：1，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：7，SEQ IDNO：8，SEQ ID NO：10，和SEQ ID NO：12给出的序列同时比对时，被表达的肽在与SEQ ID NO：1氨基酸97-101比对的序列的N-末端侧0-18氨基酸内裂解。

9.权利要求1-8任一项的方法，其中当完全表达的肽序列与SEQ IDNO：1，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：7，SEQ IDNO：8，SEQ ID NO：10，和SEQ ID NO：12给出的序列同时比对时，被表达的肽在与SEQ ID NO：1氨基酸204-209比对的序列的C-末端侧0-11氨基酸内裂解。

10.权利要求1-9任一项的方法，其中被表达的肽的裂解在Kex2加工位点的10个氨基酸内或FG序列的11个氨基酸内或两者。

11.水解磷脂的方法，其包括将磷脂与权利要求1-10任一项方法生产的磷脂酶接触。

12.生产干酪的方法，其包括将干酪用乳或干酪用乳的成分与磷脂酶接触，其中磷脂酶包括：

a)下列给出的氨基酸序列：SEQ ID NO：1的氨基酸146-153，SEQ IDNO：3的氨基酸87-94，或SEQ ID NO：12的氨基酸79-86；或除了用另一个氨基酸取代单个氨基酸外与任何这些氨基酸序列等同的序列；和

b)位于a)给出的序列的N-末端侧的至少两个半胱氨酸残基；和

c)位于a)给出的序列的C-末端侧的至少两个半胱氨酸残基。

13.生产干酪的方法，其包括将干酪用乳或干酪用乳的成分与权利要求1-10任一项方法生产的磷脂酶接触。