[发明专利]表达牛β干扰素的CHO细胞系及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及表达脊椎动物β干扰素的CHO细胞系，其含有编码所述动物β干扰素的基因。更具体地，本发明公开了表达牛β干扰素的CHO细胞系。本发明还涉及利用上述CHO细胞系生产牛β干扰素标准品的方法以及通过该方法获得的的牛β干扰素，其具有极高的比活性和稳定性，可用作牛β干扰素生物学活性检测时的标准品和用于牛传染性疾病的预防和治疗。

背景技术

I型干扰素是脊椎动物天然免疫系统的重要组成部分，为现代医学的重要研究领域。如今，病毒感染宿主时逃避干扰素等天然免疫的机制成为研究热点^[1-3]，这为病毒防治在理论上提供有力支持。牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus，BVDV)^[4]、牛疱疹病毒(Bovine herpesvirus)^[5]和牛呼吸道合胞病毒(Bovine respiratory syncytial virus)^[6]等病毒在感染宿主时，破坏I型干扰素系统都为它们突破宿主免疫系统的一个重要的机制。

I型干扰素在人的慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B)^[7，8]、慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C)^[9]、多发性硬化症(multiple sclerosis，MS)^[10]、肿瘤疾病^[11，12]及其它疾病^[13，14]的治疗中发挥了重要作用。受到人类干扰素在治疗中的鼓舞，牛I型干扰素的表达和疾病治疗研究也很多。目前，国内牛I型干扰素的生产主要采用原核^[15]和酵母表达系统^[16]。

因此，不管是I型干扰素相关的基础研究还是临床使用，都需要高活性、天然的I型干扰素样品，此外还需要对其生物学活性进行准确、便捷的定量。干扰素的定量需要稳定的标准品，目前农业部颁布的兽用生物制品质量标准中的脊椎动物天然牛白细胞干扰素是以鸡新城疫病毒诱导牛白细胞获得的，制作工艺和产品成分复杂，最终产品的活性较低，约为10000AU·mL^-1。哺乳动物细胞表达的脊椎动物干扰素是与其它表达系统相比能够正确折叠、糖基化和翻译后修饰，因此更稳定、比活性更高、更适合作为标准品，尤其对于IFN-β，而目前缺乏源于哺乳动物细胞的脊椎动物牛的IFN-β标准品。综上，获得高水平哺乳动物细胞表达的脊椎动物牛I型干扰素具有重要的基础研究和应用研究意义。

发明内容

本发明的目的为建立高效表达牛IFN-β的CHO-K1细胞表达系统。

具体地，本发明涉及如下各项：

1.一种表达牛β干扰素的CHO细胞系，其含有编码牛β干扰素的基因。

2.根据以上1所述的CHO细胞系，其中所述牛β干扰素的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.根据以上1所述的CHO细胞系，其中所述编码牛β干扰素的基因如SEQ ID NO：1所示。

4.根据以上1-3任一项所述的CHO细胞系，其中在所述编码所述动物β干扰素的基因之前加入了Kozak序列。

5.根据以上1所述的CHO细胞系，其是保藏号为CGMCC No.2415的CHO细胞系。

6.一种生产牛β干扰素标准品的方法，该方法包括：

1)培养根据以上1至5中任何一项所述的CHO细胞系；

2)从所述的CHO细胞系的培养液中提取β干扰素，用作牛β干扰素的标准品。

7.根据以上6的方法，其中所述CHO细胞系是保藏号为CGMCC No.2415的CHO细胞系。

8.根据以上6或7的方法生产的牛β干扰素标准品。

9.一种用于牛传染性疾病的预防和治疗的试剂盒，其包含根据以上6或7的方法生产的牛β干扰素标准品。

10.根据以上1至5中任何一项所述的CHO细胞系生产的牛β干扰素在制备药物中的应用，所述药物用于牛传染性疾病的预防和治疗。所述牛传染性疾病特别是牛病毒性腹泻病毒、牛疱疹病毒和牛呼吸道合胞病毒等病毒引起的疾病。