[发明专利]检测I型干扰素生物学活性的细胞系及其应用无效
申请号: | 200810109949.X | 申请日: | 2008-06-11 |
公开(公告)号: | CN101603076A | 公开(公告)日: | 2009-12-16 |
发明(设计)人: | 步志高;陈伟业 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/02;C12Q1/66;C12N5/10 |
代理公司: | 中科专利商标代理有限责任公司 | 代理人: | 吴小明 |
地址: | 150001黑龙江*** | 国省代码: | 黑龙江;23 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 干扰素 生物学 活性 细胞系 及其 应用 | ||
1.一种检测动物I型干扰素的生物学活性的方法,该方法包括以下步骤:
1)构建表达荧光素酶的重组质粒,该质粒包含Mx启动子和与该启动子可操作地 连接的编码荧光素酶的基因;
2)将步骤1)中构建的重组质粒转染所述动物细胞;
3)用待测的动物I型干扰素样品处理在步骤2)中获得的转染细胞,比较在处理 前后所述细胞的荧光素酶基因的表达水平。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述Mx启动子包含I型干扰素应答的关键 基因序列(ISRE)5’-AGTTTCGTTTCT,优选是鸡Mx启动子。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其中所述动物是禽类如鸡、或哺乳动物如猪 或牛。
4.根据权利要求1或2所述的方法,其中所述I型干扰素是α或β干扰素。
5.根据权利要求1或2所述的方法,其中在步骤1)中的鸡Mx启动子的序列如 SEQ ID NO:1所示。
6.根据权利要求5所述的方法,其中在步骤1)中的重组质粒为pMxp-luc,其核 苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
7.根据权利要求1或2所述的方法,其中在步骤2)中的所述转染是稳定转染或 瞬时转染。
8.根据权利要求1或2所述的方法,其中在步骤3)中的动物I型干扰素样品是 重组表达所述动物I型干扰素的细胞系的培养上清液或相应I型干扰素重组质粒转染 哺乳动物细胞的培养上清液,优选处理转染细胞5至6小时,优选所述细胞系是BHK-21 细胞或CHO细胞。
9.根据权利要求1或2所述的方法,其中在步骤2)中获得的动物细胞是 MDBK-Mxp-Luc细胞系,其保藏编号为CGMCC 2416。
10.MDBK-Mxp-Luc细胞系,其保藏编号为CGMCC 2416。
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